[发明专利]咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测引物组、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测引物组，包括以下引物：

检测引物一：5'-AAGGGTGAGCTCTGTGGCTC-3'；

检测引物二：5'-AAGGGTGAGCTCTGTGGCTA-3'；

检测引物三：5'-CCAGGCAGAAGATGGCAGAG-3'；

内控引物一：5'-AGCAAGCAGGAGTATGACG-3'；以及

内控引物二：5'-GAAAGGGTGTAACGCAACT-3'。

2.一种咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测试剂盒，其特征在于：包括盒体和置于盒体内且分别装于容器中的权利要求1所述的五种引物。

3.根据权利要求2所述的咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测试剂盒，其特征在于：还包括分别装于容器中的PCR反应预混液、阳性质控品一、阳性质控品二和阴性质控品，所述阳性质控品一为CYP1A2基因的野生质粒，所述阳性质控品二为CYP1A2基因的C5246A突变质粒，所述阴性质控品为纯化水。

4.根据权利要求3所述的咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒内部设有两个独立的腔体，所述腔体内设有海绵，所述检测引物一、检测引物二、检测引物三、内控引物一、内控引物二、PCR反应预混液、阳性质控品一、阳性质控品二和阴性质控品分别装于试管内，所述海绵上设有用于固定试管的固定孔，所述试管置于固定孔内，所述PCR反应预混液和纯化水设置于一个腔体内，所述检测引物一、检测引物二、检测引物三、内控引物一、内控引物二、阳性质控品一和阳性质控品二设置于另一腔体内。

5.一种咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测方法，其特征在于：使用权利要求1所述的检测引物一和检测引物三对CYP1A2基因rs762551位点的野生基因进行检测，使用权利要求1所述的检测引物二和检测引物三对CYP1A2基因rs762551位点的突变基因进行检测。

6.根据权利要求5所述的咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

a.将PCR反应预混液、检测引物一、检测引物三和水混合均匀，得到反应混合液一；将PCR反应预混液、检测引物二、检测引物三和水混合均匀，得到反应混合液二；将PCR反应预混液、内控引物一、内控引物二和水混合均匀，得到反应混合液三；

b.将待测样本DNA分别加入到反应混合液一、反应混合液二和反应混合液三中，组成反应体系一、反应体系二和反应体系三，进行PCR扩增反应；

c.分别检测几种反应体系的荧光强度，判定检测结果。

7.根据权利要求6所述的咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测方法，其特征在于：待测样本数为n，则步骤a中制备n+2+1份反应混合液一、n+2+1份反应混合液二和n+1份反应混合液三；在步骤b中，n份反应混合液一中加入待测样本DNA，一份反应混合液一加入阳性质控品一，一份反应混合液一加入阴性质控品，其余一份备用；n份反应混合液二中加入待测样本DNA，一份反应混合液二加入阳性质控品二，一份反应混合液二加入阴性质控品，其余一份备用；n份反应混合液三中加入待测样本DNA，另一份备用。

8.根据权利要求5、6或7所述的咖啡因代谢能力相关基因CYP1A2基因多态性检测方法，其特征在于：步骤c中，以SYBR信号达到设定的阈值所需的的循环次数Ct值作为判断标准，Ct值小于32为阳性，Ct值大于35为阴性，Ct值介于32到35之间为弱阳性。