[发明专利]一种(R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种(R)-2-(2,5-二氟苯基)吡咯烷的制备方法，其特征在于，其包括：在亚胺还原酶和还原型辅酶NADPH的存在下，将5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯进行加氢还原反应，即可；所述的亚胺还原酶为氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:19所示的酶。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述的加氢还原反应的体系中：

所述的5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯在所述的加氢还原反应中的初始浓度为0.01～0.05g/mL；

所述的亚胺还原酶来自菌体，所述的菌体的用量与5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯的用量的质量比为0.8:1～2.4:1；

所述的还原型辅酶NADPH的用量与所述的5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯的用量的质量比为1:200～1:10。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，

所述的5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯在所述的加氢还原反应中的初始浓度为0.02g/mL、0.03g/mL或者0.04g/mL；

所述的菌体的用量与5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯的用量的质量比为1.92:1或者1.44:1；

所述的还原型辅酶NADPH的用量与所述的5-(2,5-二氟苯基)-3,4-二氢-2H-吡咯的用量的质量比为1:100。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的亚胺还原酶的浓度为0.5～5U/mL。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的亚胺还原酶的浓度为2.35U/mL、3.14U/mL或者3.92U/mL。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的加氢还原反应在水中进行；

所述的加氢还原反应的体系的pH为6～7；

和/或，所述的加氢还原反应在20～50℃下进行。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的加氢还原反应的体系的pH为6.4～6.6；

和/或，所述的加氢还原反应在28～40℃下进行。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的加氢还原反应的体系的pH为6.5；

和/或，所述的加氢还原反应在30℃或者35℃下进行。

9.如权利要求1～8中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法还包括：在脱氢酶以及供氢体的存在下，将氧化型辅酶NADP⁺进行还原反应，得到所述的还原型辅酶NADPH即可。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，

所述的还原反应在水中进行；

所述的还原反应的反应体系的pH为6～7；

所述的还原反应的反应体系的温度为20～50℃。

11.如权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述的还原反应的反应体系的pH为6.4～6.6；

所述的还原反应的反应体系的温度为28～30℃。

12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述的还原反应的反应体系的pH为6.5。

13.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述的脱氢酶为葡萄糖脱氢酶、醇脱氢酶或甲酸脱氢酶；

和/或，所述的供氢体为葡萄糖、异丙醇或甲酸盐。

14.如权利要求13所述的制备方法，其特征在于，当所述的脱氢酶为醇脱氢酶时，所述的供氢体为异丙醇；当所述的脱氢酶为葡萄糖脱氢酶时，所述的供氢体为葡萄糖；当所述的脱氢酶为甲酸脱氢酶时，所述的供氢体为甲酸盐。