[发明专利]一种抗除草剂蛋白Bar的胶体金免疫层析速测卡

说明书

本发明公开了属于生物工程技术领域的一种用于转基因水稻抗除草剂蛋白Bar的胶体金免疫层析速测卡及其使用方法，所述胶体金免疫层析速测卡包括卡壳和卡壳内的试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，所述金标垫包被抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体‑胶体金结合物。该速测卡特异性强，灵敏度高，并且，操作简便、快速、准确，适用于转基因水稻及其产品中抗除草剂蛋白Bar的现场快速检测以及安全性评价。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种用于转基因水稻抗除草剂蛋白Bar胶体金免疫层析速测卡。

背景技术

转有抗除草剂基因作物的种植，使在田间喷洒除草剂成为有效防除杂草方式，也因而使抗除草剂性状成为农业生产中最具优势的性状之一。目前，抗除草剂作物占全球转基因作物的80％以上。从发展趋势上看，转基因的作物比例仍在不断增加。

链霉菌(streptomyces)中Bar基因表达的蛋白在乙酰辅酶A存在的情况下能催化乙酰辅酶A与除草剂草铵膦的游离氨基结合，使L-草铵膦变为乙酰-L-草铵膦，从而使除草剂失活，赋予转基因作物抗除草剂特性。Bar基因作为遗传转化中的标记基因广泛应用于基因工程育种中。

随着转基因作物的飞速发展带来巨大经济利益的同时，人们也越来越关注转基因作物可能带来的不可预期的食用安全及环境安全性问题。因此建立合适的方法对转基因食品中转基因成分进行鉴定与检测，能够促进农业转基因生物的安全管理，保障人、动物以及微生物的安全，能够保护生态环境。为了对转基因水稻或者其衍生物中Bar蛋白进行快速的定量或定性分析，研究并得到抗除草剂Bar蛋白的单克隆抗体具有非常大的意义。

免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸 (HAuCL4)在还原剂如抗坏血酸、柠檬酸钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金标记技术是免疫层析快速诊断的核心技术，它以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应，其实质是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于转基因水稻抗除草剂蛋白Bar的胶体金免疫层析速测卡及其使用方法，从而适用于转基因水稻及其产品中抗除草剂蛋白 Bar的现场快速检测以及安全性评价。

为实现上述目的，本发明提供了一种胶体金免疫层析速测卡，包括卡壳和卡壳内的试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，所述金标垫包被抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体-胶体金结合物。

上述胶体金免疫层析速测卡在另一种实施方式中，抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.17083的Bar单抗杂交瘤细胞株PA1-18030030/1B8 3D6分泌得到。

上述胶体金免疫层析速测卡在另一种实施方式中，反应膜上设有包被抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体的检测线和包被羊抗鼠IgG的质控线。

上述胶体金免疫层析速测卡在另一种实施方式中，所述反应膜上设有的包被抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.17084的Bar单抗杂交瘤细胞株PA1-18030030/6F5 1D2分泌得到。

上述胶体金免疫层析速测卡在另一种实施方式中，检测线和质控线间隔 0.5-1.0cm。