[发明专利]一种鉴定水牛乳中掺假的检测方法

说明书

本发明公开了一种鉴定水牛乳中掺假的检测方法，包括以下步骤：先样品采集及仪器准备，再配制BisTris、盐酸胍、柠檬酸钠和DTT的混合溶液作为工作液Ⅰ，配制盐酸胍溶液作为工作液Ⅱ；然后分别取水牛乳和待测牛乳样品适量并进行以下操作：加入等体积的工作液Ⅰ，旋涡混合后再离心并撇去上层脂肪，取底层溶液置于新的离心管中，加入工作液Ⅱ混合经滤膜过滤；然后置于高效液相自动进样色谱仪中测试得到指纹谱图；将指纹谱图进行比对分析。本发明提供了一种快速检测水牛乳中是否掺杂黑白花牛乳的检测方法，本方法具有良好的重现性和专属性，能够得到样品间具有代表性的指纹图谱，能快速稳定地分析水牛奶中是否掺入荷斯坦奶源。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，特别涉及一种鉴定水牛乳中掺假的检测方法。

背景技术

目前市场上的水牛奶良莠不齐，存在较多以普通奶牛乳冒充水牛乳的现象。而水牛乳营养物质丰富，研究表明，除乳糖外，总固形物、脂肪、蛋白质、灰分均高于牛奶和人奶[1]，特别是蛋白质，平均含量约为4.5％，约为荷斯坦奶牛的1.5倍，人类母乳的2.8倍，被誉为“奶中之王”，具有中国芝士 之称。研究表明，水牛乳具有多种活性多肽，具有抗菌消炎、增强免疫、抗氧化、抗衰老、降酯降压和抗癌的作用。市场上，水牛乳价格大约是荷斯坦牛牛乳的3倍。这使得不法商家在水牛乳中勾兑黑白花乳，谋取暴利的同时也造成了奶品质量和安全的隐患。

目前针对水牛乳品鉴别的检测方法主要有：LTQ-Orbitrap液-质联用技术鉴定水牛奶酪蛋白，也就是采用LTQ-Orbitrap液-质联用技术分别对乳源酪蛋白的4种主要组分进行分析,搜索数据库获得4种组分的氨基酸全序列，与水牛奶4种酪蛋白组分进行比对；毛细血管电泳系统分析水牛奶酪蛋白进行定量检测；基于质谱的指纹图谱识别水牛奶酪蛋白和大豆酪蛋白差异性；利用实时荧光PCR技术检测乳制品中水牛乳成分等。以上几种方法都是以水牛奶中酪蛋白为研究对象进行水牛源鉴定，且所用仪器设备昂贵，普通基础实验室无法匹配。而荷斯坦牛数量多，且泌乳期的产奶量大，因而黑白花乳成了勾兑水牛乳的首选，因此，需要寻找一种解决方法解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于：针对上述存在的问题，提供了一种快速检测水牛乳中是否掺杂黑白花牛乳的检测方法，本方法具有良好的重现性和专属性，能够得到样品间具有代表性的指纹图谱，能快速稳定地分析水牛奶中是否掺入荷斯坦奶源。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种鉴定水牛乳中掺假的检测方法，包括以下步骤：

(1)样品采集及仪器准备：采集水牛乳和待测牛乳样品后冷藏保存，同时准备好高效液相自动进样色谱仪及其匹配色谱柱并清洗干净备用；

(2)溶液制备：配制BisTris、盐酸胍、柠檬酸钠和DTT的混合溶液作为工作液Ⅰ，配制盐酸胍溶液作为工作液Ⅱ；

(3)供试品制备：分别取步骤(1)中采集的水牛乳和待测牛乳样品适量并进行以下操作：加入等体积的工作液Ⅰ，旋涡混合后形成混合液静置，再将混合液离心并撇去上层脂肪，取底层溶液置于新的离心管中，加入工作液Ⅱ混合均匀并经滤膜过滤后得到上机试品；

(4)供试品测试：将步骤(3)中制备的水牛乳和待测牛乳上机试品置于高效液相自动进样色谱仪中并设置测试条件进行梯度洗脱测试，得到指纹谱图； (5)结果分析：将步骤(4)中水牛乳和待测牛乳测试的指纹谱图进行比对分析，通过寻找对水牛乳蛋白分离情况不造成干扰的特征峰识别待测牛乳。

进一步地，在步骤(1)中，所述冷藏保存的温度为4℃，所述色谱柱为 ZORBAX300SB-C8柱。

进一步地，在步骤(2)中，所述工作液Ⅰ中BisTris的浓度为0.1-0.3mol/L，盐酸胍的浓度为3-8mol/L，柠檬酸钠的浓度为5-7mmol/L，DTT的浓度为 15-25mmol/L，所述工作液Ⅱ中盐酸胍3-6mol/L。