[发明专利]一种利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法

权利要求书

1.一种利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，(1)在微流控液滴内部实施葫芦脲、荧光染料、氨基酸分子的超分子主客体组装反应；(2)利用荧光检测技术，在微流控液滴内部检测超分子荧光；(3)将微生物包裹到微流控液滴后，进行孵育和培养，将葫芦脲/荧光染料超分子复合物注入到封装有微生物的微液滴中，根据每个微流控液滴的荧光强度，辨别不同氨基酸代谢能力的微生物；(4)采用荧光分析和微流控液滴分选技术，筛选不同氨基酸代谢能力的微生物；

所述超分子荧光为荧光染料分子进入到葫芦脲的空腔中消除了染料分子自淬灭后所呈现的荧光。

2.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，采用微流控芯片生成的油包水的液滴，油相为氟油、硅油、矿物油，水相为溶解有葫芦脲、荧光染料、氨基酸分子的一种或者几种物质，其中所述的葫芦脲为8个重复单元的瓜环葫芦脲分子(CB[8])；所述荧光染料为双阳离子荧光染料MDAP，MDPP，PDI；所述氨基酸分子为色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸。

3.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，所述荧光的波长范围在380nm-700nm之间，利用光电倍增管或者雪崩光电二极管把荧光信号转换为电信号进行荧光检测。

4.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，所述微生物包括能够代谢氨基酸的大肠杆菌，酿酒酵母，谷氨酸棒状杆菌，钝齿棒状杆菌中的一种或者多种，所述包裹到微流控液滴是指以泊松分布为理论指导，通过对微生物进行稀释，油相包裹水相的方式形成的单分散的单细胞液滴。

5.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，所述注入为将葫芦脲/荧光染料超分子复合物采用微流控液滴注射或皮升、微升级别的超分子复合物和微生物液滴的融合。

6.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，所述荧光强度是利用与光子探测器连接的数据采集卡或者示波器对荧光进行数据接收和转换，所述不同氨基酸代谢能力是指包裹在微流控液滴内部的一个或者多个微生物在培育过程中代谢的一种或者多种氨基酸。

7.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，根据不同的荧光强度，将包裹有微生物的微流控液滴进行高通量筛选，所述高通量筛选的方法包括介电电泳分选方法。

8.根据权利要求2-7任一项所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，采用微流控芯片产生油包水的微液滴，实现葫芦脲、荧光染料、氨基酸分子和微生物的包裹、分析、分离，所述微流控芯片材料为聚二甲基硅氧烷(PDMS)，玻璃，或者塑料。

9.根据权利要求1所述利用超分子荧光微流控技术筛选微生物的方法，其特征在于，所述葫芦脲与荧光染料的摩尔比为1∶0.1～2，检测分子的浓度范围为大于或等于1μM。