[发明专利]铜-64标记DNA单链的方法

说明书

本发明公开了一种铜‑64标记DNA单链的方法，包括如下步骤：将ssDNA与螯合剂p‑SCN‑Bn‑NOTA进行偶联；将2mCi溶于0.1M HCl溶液的铜‑64，与100μL的醋酸钠溶液混匀，加入500μL的NOTA‑ssDNA，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱检测，反应结束后，得到的混合物通过NAP‑5脱盐柱进行纯化，0.05M的乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物⁶⁴Cu‑ssDNA。利用本发明所得的铜‑64标记DNA单链与不同结构的含有手臂链的DNA多面体混合杂交，可以制备出不同结构的铜‑64标记DNA多面体，从而实现PET分子探针的制备。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及一种铜-64标记DNA单链的方法。

背景技术

脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid，DNA)是所有已知生物和一些病毒的遗传信息载体。基于Watson-Crick碱基配对原则，DNA分子之间发生相互作用，构成了DNA多面体结构的可编程性及DNA纳米技术的基础。通过DNA纳米技术，DNA分子能够自组装配成人工纳米结构，即DNA多面体结构。这些DNA多面体结构具有一些独特性质：明确定义的尺寸(纳米级)，几何形状(精确、复杂的三维空间结构)，生物相容性(由DNA组成)，易于修饰(利用化学手段对组成DNA多面体结构的单链DNA进行修饰)。这些特性使得DNA成为各种应用的理想选择，其可以单独使用或与其他材料组合用于多种生物学和生物医学应用。目前，一些DNA多面体结构已被用于生物传感，分子成像或药物载带等方面。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种铜-64标记DNA单链的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

铜-64标记DNA单链的方法，包括如下步骤：

S1、将ssDNA与螯合剂p-SCN-Bn-NOTA进行偶联

首先对ssDNA的5’端进行氨基修饰；然后将一定量的氨基修饰ssDNA溶解于磷酸盐缓冲液中，配成0.1mM的ssDNA溶液；再量取0.5mg p-SCN-Bn-NOTA粉末溶解在DMSO中，将其加入ssDNA溶液中，并使用碳酸钠缓冲液调节pH至8.5-9.0；

将反应溶液在室温下持续振荡2小时，反应结束后，利用NAP-5脱盐柱对反应溶液进行纯化，1xPBS作为洗脱缓冲液，得到纯化后的偶联NOTA的ssDNA，即为NOTA-ssDNA；

S2、将2mCi溶于0.1M HCl中溶液的铜-64，与100μL的醋酸钠溶液混匀，加入500μL的NOTA-ssDNA后，在37℃下反应1小时，在反应期间，放射性标记率通过薄层色谱(ThinLayer Chromatography，TLC)检测，反应结束后，得到的混合物通过NAP-5脱盐柱进行纯化，0.05M乙二胺四乙酸钠溶液用作流动相，得到纯化的目标产物⁶⁴Cu-ssDNA。

本发明所得的铜-64标记DNA单链可用于制备基于DNA多面体结构的PET分子探针，所得的PET分子探针使用的是正电子核素，能够同时发射两个背向光子，可实现病灶的精准定位，分辨率高，图像清楚。

本发明具有以下有益效果：

利用本发明所得的铜-64标记DNA单链(⁶⁴Cu-ssDNA)，与不同结构的含有手臂链的DNA多面体混合杂交，可以制备出不同结构的铜-64标记DNA多面体。而所得的铜-64标记DNA多面体可用于制备基于DNA多面体的PET分子探针，所得的PET分子探针使用的是正电子核素，能够同时发射两个背向光子，可实现病灶的精准定位，分辨率高，图像清楚。

附图说明

图1为本发明实施例铜-64标记DNA单链的制备方法的路线图。