[发明专利]一种检测方法或试剂盒

说明书

本发明设计一种检测2‑亚氨基‑1‑甲基咪唑啉‑4‑酮的方法或试剂盒，属于医学检验技术领域。试剂盒组分中包含如下通式A化合物。本发明的检测方法或试剂盒可以有效消除或降低由样本中存在的一些常见干扰物质对测定结果的干扰，提高检测结果的可靠性。

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域。特别地，本发明涉及一种用于检测2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮的方法或试剂盒。

背景技术

2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮是判断肾功能的一个重要指标，临床上，有多种2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮的检测方法，例如苦味酸法、氧化酶法、电化学法、脱氢酶法。

其中目前临床上应用最多的方法为氧化酶法，其反应原理包括的步骤为：将2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮转变成为N-甲基胍基乙酸，将N-甲基胍基乙酸转变成为N-甲基甘氨酸，然后将N-甲基甘氨酸氧化产生过氧化氢，通过检测生成的过氧化氢的量来计算2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮的含量。

氧化酶法具有经济方便的优点，但是，氧化酶法检测步骤中的中间物为过氧化氢，而过氧化氢不稳定，容易受到样本中存在的其它物质的干扰。一个常见的例子：当患者服用或注射含2，5-二羟基苯磺酸盐或多巴类的药物后，患者血液中存在的2，5-二羟基苯磺酸或其盐或多巴类药物会导致2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮的测定结果严重偏低，从而造成对患者疾病情况误判，引起严重后果。

另外，我们通过实验还发现，还有众多的化合物，例如生育酚、龙胆酸、没食子酸、儿茶酸、美多巴等，同样也会干扰2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮的检测，引起结果误判。

因此，本领域需要合适的技术，能够消除或减轻样本中2，5-二羟基苯磺酸盐或多巴类的药物的干扰，保证2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮检测结果的可靠性。

发明内容

本发明提出了一种检测方法或试剂盒，用于检测样本中2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮的含量，包括：使测试样本与通式A表示的化合物进行接触的步骤；

以及包含上述通式A所述化合物的试剂盒。另外，本发明提出的检测方法或试剂盒还包括将2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮转化为过氧化氢的步骤；以及通过检测过氧化氢而得到2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮含量的步骤。

在本技术领域，采用几个工具酶偶联将2-亚氨基-1-甲基咪唑啉-4-酮转化为过氧化氢的方法属于公知技术，有大量报道对其中工具酶的厂家、用量、在试剂盒的放置位置、所需要的缓冲体系、表面活性剂、防腐剂等等进行论述和组合，在此不多述及。

检测过氧化氢可以采用电化学电极方法，但使用最广的还是通常命名为Trinder’s反应的方法。Trinder’s反应中，在过氧化物酶的作用下，可以将过氧化氢与4-氨基安替比林或其类似物与色原生成有色化合物。通常色原包括苯酚、以及简写为ADOS、ADPS、ALPS、DAOS、HDAOS、MADB、MAOS、TODB、TOOS、TOPS等等种类的新型色原，不同的色原灵敏度和稳定性有差异，对其合适用量也有大量公开技术报道，在此也不多论述。

在如上所述的通式A的化合物中，其中R1，R2，R3，R4为可连接在碳链上的基团，最常见的是烃基或修饰烃基，以及氢原子，可以相同也可以不同；R5为可连接在碳链上的基团。

在一个优选的例子中，R1，R2，R3，R4都是甲基，但显然，根据现有公知技术，也可以设计成R1，R2，R3，R4为各种相同或不同的取代基，常见的如乙基，或者丙基、各种脂肪烃链、芳香烃、各种取代烃如卤代烃、脂肪酸链、含酮基链等等，以及它们的各种组合，包括与甲基或氢原子的各种组合。这都属于常规的有机化学技术，在此也不多述及。