[发明专利]用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法

权利要求书

1.一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1)以200个氨基酸残基为缺失单位，构建USP10缺失突变表达载体，免疫共沉淀和WB检测USP10缺失突变蛋白片段与EIF4G1的结合情况，如果某一片段不能与EIF4G1结合，说明关键残基存在于缺失区域内，初步确定结合关键残基所在区域；

2)在非小细胞肺癌细胞株中过表达以上步骤筛选到的不能与EIF4G1结合的USP10缺失突变表达载体，WB检测EIF4G1的表达水平，观察该缺失突变对EIF4G1表达水平的影响；

3)在上面筛选出的关键区域内，进一步缩短缺失突变片段长度，以50个氨基酸残基为缺失单位构建缺失突变表达载体，通过哺乳动物细胞表达，免疫共沉淀和WB检测USP10缺失突变蛋白片段与EIF4G1结合情况，进一步确定结合关键残基所在区域；

4)按以上步骤2)、3)的方法方法检测EIF4G1的表达水平，进一步缩小影响USP10分子中与EIF4G1结合的关键区域；

5)重复以上筛选方法，进一步将结合区域缩短至20-30氨基酸残基时，按以上方法检测EIF4G1的表达水平；

6)进行一系列关键残基的定点突变，用丙氨酸替换以上区域内可能的关键残基构建定点突变表达载体，采用哺乳动物细胞表达，免疫共沉淀检测和WB检测USP10定点突变蛋白与EIF4G1的结合情况，最终确定USP10分子中与EIF4G1结合的关键残基；

7)在以上片段缺失突变筛选过程中，如出现一个以上USP10缺失突变肽段与EIF4G1结合力下降的情况，可能是USP10与EIF4G1结合的关键残基分布在两个或多个不同缺失突变区域内，则改变缺失突变肽段划分区域，或者不同区域进行组合，按照以上方法逐步筛选，缩短USP10分子中与EIF4G1结合的关键残基所在区域；

8)在关键残基的定点突变筛选过程中，如出现一个以上USP10突变肽段与EIF4G1结合力下降的情况，可能是USP10序列中一个以上氨基酸是与EIF4G1结合的关键残基，则同时突变2个或多个氨基酸，按照以上方法逐步筛选，直到最终确定USP10分子中与EIF4G1结合的关键残基。

2.根据权利要求1所述的一种用于抑制EIF4G1表达的USP10模拟多肽的制备方法，其特征在于：在步骤7)中，用丙氨酸替换以上区域内带电荷氨基酸和带有较大疏水侧链的氨基酸残基。