[发明专利]一种西马特罗半抗原、抗原及其化学发光酶联免疫检测试剂盒与应用

说明书

本发明公开了一种西马特罗半抗原、抗原及其化学发光酶联免疫检测试剂盒与应用。本发明公开了西马特罗半抗原，同时也公开了相应的人工抗原和化学发光酶联免疫检测试剂盒及其应用。本发明提供的西马特罗半抗原与载体蛋白连接可以得到西马特罗抗原。所述西马特罗抗原可应用于制备西马特罗特异性抗体。本发明制备方法简便可行、成本较低。本发明化学发光酶联免疫检测试剂盒的检测范围为0.10～8.10μg/L，灵敏度为0.51μg/L，检出限为0.10μg/L，回收率为80.81％～127.80％，检出限低、灵敏度高、稳定性好，成本低，速度快，非常适合大量样品的痕量分析与批量检测，具有重要的实际应用推广意义。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域。更具体地，涉及一种西马特罗半抗原、抗原及其化学发光酶联免疫检测试剂盒与应用。

背景技术

西马特罗(Cimaterol，CIM)，分子式C₁₂H₁₇N₃O，属于一种β-受体激动剂。在医学上，西马特罗能调节交感神经兴奋、松弛气管平滑肌，因此常用于治疗哮喘。此外，研究表明，西马特罗将对动物体内的营养进行再分配，促进蛋白质沉积而抑制脂肪形成，从而显著提高动物的瘦肉率。在动物生产中，存在非法添加西马特罗的现象。西马特罗在动物体内代谢缓慢、作用时间久、性质稳定、药物残留率高，通过动物体内长期蓄积与组织中，对食用者的身体健康造成较大的危害，甚至威胁生命安全。西马特罗作为新型“瘦肉精”物质，检测手段滞后，尤其缺乏快速检测产品。

国家标准中检测西马特罗的主要方法有高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)。采用色谱法进行检测，成本高，耗时长，要达到较高的灵敏度，通常需要加大样品称取量，而氯霉素样品前处理多采用有机试剂萃取，蒸干后复溶的方式，加大样品量意味着萃取剂用量相应提高，从而使前处理操作更为繁琐，消耗时间延长，而且因设备和维护费用高昂，而且对仪器操作员的技术要求较高，不适用于现场检测和监控，如CN 103675145 A。色谱法尽管能达到大部分检测要求，但无法应对大量样品现场快速检测的需求，因而通常作为确证方法。而免疫分析法具有成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低等特点。因此在食品安全检测中，往往先用免疫分析方法进行初筛后，再对阳性样本用HPLC或GC进行确证。

中国专利文献CN 103630689 A公开了一种检测西马特罗药物残留的酶联免疫试剂盒及其制备方法与应用，采用重氮化法合成西马特罗人工完全抗原，该ELISA方法虽具有简单、快速、灵敏的特点，也适宜大规模的筛查工作，但其灵敏度有一定的制约。因此建立一种经济、方便、可靠、特异、敏感、快速、准确的定量检测动物性食品中西马特罗的方法，具有相当的必要性。化学发光免疫分析法是将化学反光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种标记免疫测定技术。其检测原理是：固相载体表面的抗原和样品中相应抗原竞争性地与抗体结合，再加入酶标二抗形成抗原抗体酶标复合物，最后洗涤加入发光底物酶促发光，通过检测发光强度值，而抗原浓度与发光强度值呈负相关。此方法的突出优点为灵敏度高，线性动力学范围宽，光信号持续时间长，分析方法简便快速，结果稳定、误差小，安全性好且使用期长。相比仪器分析方法的优势表现在：能实现大批量现场检测，且更经济、省时。

发明内容

本发明的首要目的在于克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一种西马特罗半抗原。该半抗原具有准确、灵敏、快速、能够高通量检测西马特罗的优点，为西马特罗快速检测产品的开发提供了一定的理论指导，对食品安全监控具有重要意义。

本发明的第二个目的是提供应用上述西马特罗半抗原制备得到的西马特罗抗原。

本发明的第三个目的是提供上述西马特罗抗原在制备西马特罗特异性抗体中的应用。

本发明的第四个目的是提供应用上述西马特罗抗原制备得到的西马特罗特异性抗体及其制备方法。

本发明的第五个目的是提供上述西马特罗特异性抗体在检测西马特罗中的应用。