[发明专利]特异性抑制肝内LECT2表达的腺相关病毒、构建及应用有效
| 申请号： | 201910488390.4 | 申请日： | 2019-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN110592030B | 公开（公告）日： | 2022-03-22 |
| 发明（设计）人： | 虞朝辉;厉有名;王景骅;洪东升 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;A61K31/7088;A61P1/16 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 冷红梅 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性 抑制 lect2 表达 相关 病毒 构建 应用 | ||
1.一种特异性抑制肝内LECT2表达的腺相关病毒，由如下方法构建获得：
（1）AAV293细胞经复苏，传代培养，待已贴壁的AAV293细胞密度长至30%~40%时，进行下一步质粒转染；
（2）构建含LECT2抑制序列的目的质粒，将其与AAV2/8质粒和δF6质粒共同孵育，得到复合物；所述抑制序列为：CGTGCATTCTAACAGAAACAT；所述目的质粒、AAV2/8质粒和δF6质粒用量之比为5~10:5~10:20；
（3）将步骤（2）复合物以PEI转染法转染至步骤（1）AAV293细胞中，经裂解，纯化，获得所述特异性抑制肝内LECT2表达的腺相关病毒。
2.构建权利要求1所述的腺相关病毒的方法，所述方法包括：
（1）AAV293细胞经复苏，传代培养，待已贴壁的AAV293细胞密度长至30%~40%时，进行下一步质粒转染；
（2）构建含LECT2抑制序列的目的质粒，将其与AAV2/8质粒和δF6质粒共同孵育，得到复合物；所述目的质粒、AAV2/8质粒和δF6质粒用量之比为5~10:5~10:20；所述抑制序列为：CGTGCATTCTAACAGAAACAT；
（3）将步骤（2）复合物以PEI转染法转染至步骤（1）AAV293细胞中，经裂解，纯化，获得所述特异性抑制肝内LECT2表达的腺相关病毒。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于步骤（2）中所述目的质粒、AAV2/8质粒和δF6质粒用量之比为7:7:20。
4.权利要求1所述腺相关病毒在制备防治非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用。
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