[发明专利]一种重组植酸酶基因、产朊假丝酵母植酸酶工程菌及应用

权利要求书

1.一种重组植酸酶基因构建的植酸酶工程菌，其特征在于，所述重组植酸酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示；

所述植酸酶工程菌以产朊假丝酵母为宿主；

所述植酸酶工程菌按如下方法构建：将SEQ ID NO.1所示重组植酸酶基因通过酶切位点Xba I、BamH Ⅰ克隆到产朊假丝酵母的表达载体pGAPURA的相应位点，形成重组表达载体pGAPURA-yk1，转化大肠杆菌，提取pGAPURA-yk1质粒，转化至产朊假丝酵母，获得产朊假丝酵母植酸酶工程菌；

所述产朊假丝酵母为产朊假丝酵母(Candida utilis)CICC 1314。

2.一种权利要求1所述重组植酸酶基因构建的植酸酶工程菌在水解植酸磷中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的应用为：以含所述重组植酸酶基因的植酸酶工程菌经发酵培养获得的发酵液为酶源，加入含植酸磷的原料和水，在28～37℃、pH4.5～6.5条件下进行水解，实现对原料中植酸磷的降解。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述原料包括豆粕。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述酶源加入量以植酸酶酶活计为0.3～1.5U/g原料，所述水体积用量以原料重量计为0.5L/kg。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述发酵液按如下方法制备：

(1)含重组植酸酶基因的工程菌接种至YPD固体培养基上，28℃培养2天，获得活化单菌落；YPD固体培养基组成：葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母提取物10g/L，琼脂15g/L，溶剂为去离子水，pH自然；

(2)挑取YPD平板培养基上活化的单菌落接种于5mL的YPD液体培养基中，28-30℃、200rpm过夜培养，获得种子液；YPD液体培养基是将YPD固体培养基中琼脂去除；

(3)将种子液以体积浓度1-5％的接种量接种于YPD液体培养基中，28-30℃、200rpm发酵培养至OD600为0.7-1.2，获得发酵液。