[发明专利]一种人类肺部滴虫感染检测的引物及试剂和方法

权利要求书

1.一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的引物包含：

扩增上下游引物1及其变体；

扩增上下游引物2及其变体；

其中，所述的扩增上下游引物1和引物2均是以不同种类滴虫的保守序列为模板设计，所述引物1和引物2的序列与人类支气管肺泡灌洗液中存在的核酸序列具有PCR退火条件下低互补结合能力；所述的扩增上下游引物2与扩增上下游引物1的关系为：扩增上下游引物2结合在扩增上下游引物1的PCR产物内部。

2.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的保守序列截取自不同种类滴虫的18S rRNA基因序列。

3.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的变体为参照引物的变体，所述的参照引物为扩增上下游引物1和扩增上下游引物2，所述的变体与所述的参照引物保持相同的扩增功能，所述相同的扩增功能为可以扩增出不同种类滴虫的基因，且无法扩增出人类支气管肺泡灌洗液中存在的本底基因。

4.根据权利要求3所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的变体的引物序列长度为18bp-27bp，GC含量为40-60％，自身不易形成严重的发卡结构和二聚体结构。

5.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的人类支气管肺泡灌洗液包括：正常人类的支气管肺泡灌洗液、患有或不患有肺部滴虫感染的人类支气管肺泡灌洗液、患病或不患病的人类的支气管肺泡灌洗液；所述的人类包括各个年龄段的人类。

6.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的低互补结合能力为PCR反应退火温度至多为45℃时，引物1和引物2的序列与人类支气管肺泡灌洗液中存在的核酸序列不会发生动态过程中的相对互补结合或可以发生部分互补结合但是无法到达延伸反应所需的结合自由能。

7.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的扩增上下游引物1为：

TRC1-F 5′-GGTAATTCCAGCTCTGCG-3′；

TRC1-R 5′-TGGTAAGTTTCCCCGTGT-3′。

8.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的扩增上下游引物2为：

TRC2-F 5′-GTTAAAACGCCCGTAGTC-3′；

TRC2-R 5′-CCAGAGCCCAAGAACTAT-3′。

9.根据权利要求1所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的不同种类的滴虫在进化树分支上属于不同物种或相同物种的亚种。

10.根据权利要求9所述的一种人类肺部滴虫感染检测的引物，其特征在于，所述的滴虫包括：阴道毛滴虫、口腔滴虫、人五毛滴虫和四毛滴虫。

11.一种包含权利要求1-10的引物的检测试剂，包含阳性对照、阴性对照、质控品以及巢式PCR通用试剂，其特征在于，该检测试剂还包括：

PCR反应液I；所述的PCR反应液I包含扩增上下游引物1及其变体；

PCR反应液II；所述的PCR反应液II包含扩增上下游引物2及其变体。

12.一种包含权利要求1-11的检测试剂的人类肺部滴虫感染检测方法，其特征在于，该方法可以对人类肺部感染的多种滴虫一次性检测并鉴定，方法包括：以不同种类的滴虫的保守序列为模板设计引物，PCR反应液I和PCR反应液II制备，标本采集，巢式PCR一次性检测。