[发明专利]一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的分子标记引物及方法有效
| 申请号： | 201910494994.X | 申请日： | 2019-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN110373472B | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 徐胜勇;蔡珊珊;高天翔 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6869;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京国翰知识产权代理事务所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 吕彩霞 |
| 地址： | 316002 浙江省舟*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 褐菖鲉 三色 分子 标记 引物 方法 | ||
1.一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：总DNA提取；
S2：以线粒体12S rRNA基因的部分序列作为分子标记序列进行PCR扩增；
S3：PCR产物的回收纯化；
S4：测序；
其中，所述PCR扩增用分子标记引物包括正向引物和反向引物：
所述正向引物序列为：5’-GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC-3’；
所述反向引物序列为：5’-CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG-3’
其中，所述PCR扩增的反应体系中添加有四氢呋喃和柠檬酸铵；
所述鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法的判断标准为：测序可得，三色菖鲉的分子标记序列为SEQ ID NO.4所示，褐菖鲉的分子标记序列为SEQ ID NO.3所示。
2.根据权利要求1所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于：所述总DNA提取的材料来源为肌肉组织。
3. 根据权利要求1或2所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系为：ddH2O 10.5-31.5μL，10×buffer 1.5-4.5μL， dNTPs1.2-3.6μL，Taq酶0.1-0.27μL，DNA模板0.6-1.8μL，分子标记引物各0.6-1.8μL。
4.根据权利要求3所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于：所述DNA模板的浓度为40-80ng/μL。
5. 根据权利要求1或2所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于：所述PCR扩增程序为：94-95℃预变性4-5min，然后94-95℃变性44-46s，49-52℃退火44-46s，70-74℃延伸 44-46s，进行33-37个循环，最后70-74℃延伸8-12min。
6.根据权利要求1或2所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于：所述PCR产物的回收纯化采用玻璃奶法。
7.根据权利要求1所述的一种鉴别褐菖鲉和三色菖鲉的方法，其特征在于：所述测序方式为双向测序。
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