[发明专利]肝癌患者血清中筛选预后相关蛋白的方法及其应用

说明书

本发明公开了从肝癌患者血清中筛选预后相关蛋白的方法及其应用。本发明提供了一种从肝癌患者血清中筛选肝癌预后评估蛋白的方法，包括如下步骤：以若干具有5年以上生存期的肝癌患者作为A组，以若干1.5年内死亡的肝癌患者作为D组；以血清为待测样本，采用DIA技术获得在所述A组和所述D组的血清样本中差异表达的蛋白，作为候选蛋白；以PRM技术从所述候选蛋白中筛选获得目标蛋白。本发明通过DIA技术和PRM技术从肝癌患者血清样本中筛选得到10个可用于肝癌患者预后评估的差异蛋白。本发明对于肝癌患者预后评估具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，具体涉及肝癌患者血清中筛选预后相关蛋白的方法及其应用。

背景技术

肝癌是全球第五大常见癌症，癌症相关死亡率仅次于肺癌、胃癌，排在第三位。 肝癌的发病率在全球呈上升趋势，西方国家肝癌的发病率低于发展中国家，但上升趋 势也很明显，因此近年来在西方国家肝癌的研究也受到了极大的重视。综上，肝癌是 严重地威胁我国人民健康和生命安全，并制约社会经济发展的重大疾病。

制约肝癌患者疗效的一个重要因素是复发和转移。能够准确预判肝癌复发和/或转 移，对不同患者制定最佳的个体化治疗方案，有计划、合理的选择或者联合应用各种 肝癌治疗手段以及支持对症治疗等多种策略，发挥各种方法的优势，避免不恰当或过 度治疗，最大幅度地控制肿瘤，提高总体疗效，改善患者的生活质量，延长生存期，是 肝癌治疗的重要发展方向。但是，由于肝癌具有极大的复杂性和异质性，基于现有临 床分期、影像诊断学、病理分级并不能准确的预判病人的预后、治疗反应性等，具有 相同分期、相同病理学类型的肝癌常表现为不同的临床特征、治疗反应性和预后。总 之，依据传统标志物、肿瘤大小、组织病理学分级以及临床分期等指标判断患者预后 进而后续指导肝癌治疗有极大局限性，寻找稳定高效的预后判断标志物是当前肝癌研 究的重要任务。

发明内容

本发明的目的是提供从肝癌患者血清中筛选预后相关蛋白的方法及其应用

第一方面，本发明要求保护一种从肝癌患者血清中筛选肝癌预后评估蛋白的方法。

本发明要求保护的从肝癌患者血清中筛选肝癌预后评估蛋白的方法，可包括如下步骤：

(A)以若干具有5年以上生存期的肝癌患者作为A组，以若干1.5年内死亡的 肝癌患者作为D组；以血清为待测样本，采用DIA技术获得在所述A组和所述D组 的血清样本中差异表达的蛋白，作为候选蛋白；

(B)以所述A组和所述D组的血清为待测样本，采用PRM技术从步骤(A)获 得的所述候选蛋白中筛选得到目标蛋白。

其中，DIA(data-independent acquisition)技术是近年来发展起来的一种新的质谱 技术。与传统的DDA(data-dependent acquisition)质谱技术相比，DIA采用了不同的数据扫描模式：将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口，然后对每个窗口中的所有 离子进行检测、碎裂，从而无遗漏、无差异地获得样本中所有离子的信息。与DDA技 术相比，DIA技术的优势包括：(1)采集所有的离子信息，实现更高的数据覆盖度； (2)减少采集的随机性，实现极高的检测重现性、稳定性；(3)采用碎片离子定量， 定量精密度、准确性、线性范围大大提高。基于上述技术优势，DIA技术尤其适用于 大规模样本的高度覆盖、稳定和可追溯地分析。

平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring，PRM)是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术，能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进 行选择性检测，从而实现对目标蛋白质及肽段进行相对或绝对定量。在应用方面，PRM 一方面可以一定程度上替代传统的Western blot技术，另一方面使蛋白质验证不再受 制于商业化抗体，可以应用于任何生物样本，提高实验效率。