[发明专利]一种鼠疫菌减毒活疫苗株及其作为肺递送疫苗的应用

说明书

本发明公开了一种鼠疫菌减毒活疫苗株及其作为肺递送疫苗的应用。本发明保护鼠疫菌EV‑B‑SHVΔpla；与鼠疫菌EV‑B‑SHV的基因组DNA相比，鼠疫菌EV‑B‑SHVΔpla的差异仅在于敲除了序列表序列1所示的DNA分子中第7‑906位核苷酸所示的DNA分子。本发明还保护鼠疫菌EV‑B‑SHVΔpla在制备鼠疫疫苗中的应用。所述鼠疫疫苗以肺递送的方式给予。本发明还保护一种鼠疫疫苗，其活性成分为鼠疫菌EV‑B‑SHVΔpla。特异性抗体、细胞因子、载菌量的检测结果均表明，鼠疫菌EV‑B‑SHVΔpla为可用做肺递送途径免疫接种的疫苗株。

技术领域

本发明涉及一种鼠疫菌减毒活疫苗株及其作为肺递送疫苗的应用。

背景技术

鼠疫是一种流行于啮齿类动物间、通过跳蚤传播的自然疫源性疾病。在历史上曾经引起三次世界范围的大流行，夺去了上亿人的生命。鼠疫耶尔森氏菌是鼠疫的病原菌，是一种革兰氏阴性细菌，属于肠杆菌科耶尔森氏菌属，会引起三种主要的综合征，肺鼠疫、败血症、腺鼠疫。肺鼠疫通过气溶胶飞沫传播。败血症的主要起因是被感染跳蚤的叮咬，若不采取治疗，致死率可达100％。腺鼠疫也由跳蚤传播，不采取治疗可导致40-60％的致死率。人接触了感染动物的血液和组织，或暴露在有菌气溶胶的环境中均有可能被感染，甚至会导致人传染给人。

现在鼠疫感染在许多国家和地区仍然严重威胁着公共健康。接种疫苗是预防鼠疫感染的不错手段。其中鼠疫减毒活疫苗已有70多年的应用历史，具有一定的保护性。EV76株又称EV76疫苗株，是目前世界上使用最广泛的鼠疫耶尔森氏菌活疫苗株，其染色体上pgm位点缺失，而F1抗原和V抗原保持完整，接种EV76活疫苗可保护小鼠抵御鼠疫耶尔森氏菌皮下和吸入途径的攻击，具有预防腺鼠疫和肺鼠疫的免疫保护作用。但是此类疫苗株的安全性存在问题，美国实验室曾报道了一例pgm位点缺失疫苗株导致高铁血症患者死亡的病例，所以制备安全性更好的鼠YI减毒活疫苗株非常必要。

发明内容

本发明的目的是提供一种鼠疫菌减毒活疫苗株及其作为肺递送疫苗的应用。

本发明首先保护鼠疫菌EV-B-SHVΔpla；与鼠疫菌EV-B-SHV的基因组DNA相比，鼠疫菌EV-B-SHVΔpla的差异仅在于敲除了序列表序列1所示的DNA分子中第7-906位核苷酸所示的DNA分子。鼠疫菌EV-B-SHVΔpla是将鼠疫菌EV-B-SHV作为起始株，通过同源重组制备得到的。

本发明还保护鼠疫菌EV-B-SHVΔpla在制备鼠疫疫苗中的应用。所述鼠疫疫苗以肺递送的方式给予。

本发明还保护鼠疫菌EV-B-SHVΔpla的菌液形成的气溶胶在制备鼠疫疫苗中的应用。每50μl菌液中，鼠疫菌EV-B-SHVΔpla的菌量为10⁶CFU。所述鼠疫疫苗以肺递送的方式给予。

本发明还保护一种鼠疫疫苗，其活性成分为鼠疫菌EV-B-SHVΔpla。所述鼠疫疫苗以肺递送的方式给予。

本发明还保护一种鼠疫疫苗，其活性成分为鼠疫菌EV-B-SHVΔpla的菌液形成的气溶胶。每50μl菌液中，鼠疫菌EV-B-SHVΔpla的菌量为10⁶CFU。所述鼠疫疫苗以肺递送的方式给予。

本发明提供了鼠疫菌EV-B-SHVΔpla。肺递送途径进行三次免疫后，EV-B-SHVΔpla组小鼠的存活率高达100％。特异性抗体、细胞因子、载菌量的检测结果均表明，鼠疫菌EV-B-SHVΔpla为可用做肺递送途径免疫接种的疫苗株。

附图说明

图1为实施例3中的生存曲线。

图2为实施例4中肺递送组小鼠的生存曲线。

图3为实施例4中皮下注射组小鼠的生存曲线。

图4为实施例4中各组小鼠血清中特异性抗体IgG滴度的结果。