[发明专利]一种水溶性硫化氢荧光探针及其制备方法和其在水质硫化物及细胞硫化氢检测中的应用

权利要求书

1.一种水溶性硫化氢荧光探针，其特征在于，其结构式如式VI所示：

式VI中的为半乳糖。

2.一种水溶性硫化氢荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将化合物I，三甲基硅烷基乙炔，双三苯基磷二氯化钯，碘化亚铜，三乙胺按照摩尔比0.5～1:2:2:3:5加入到四氢呋喃溶液中，10℃～60℃搅拌反应24h，反应液纯化得到化合物II；

步骤二：将化合物II，氢氧化钾按照摩尔比1:4加入到甲醇溶液中，30℃～100℃反应8～48h，反应液经过纯化得到化合物III；

步骤三：将化合物III，全乙酰基保护叠氮糖，五水硫酸铜，抗坏血酸钠按照摩尔比0.5～1:2:1:2，加入到DMF水溶液中，在30℃～100℃的温度下反应20h，将反应液纯化得到目标化合物IV；

步骤四：将化合物IV，氢氧化钠按照摩尔比1:4加入到甲醇溶液中，在40℃～100℃的温度下反应4h，将反应液纯化得到目标化合物V；

步骤五：将化合物V，叠氮三甲基硅烷，亚硝酸叔丁酯按照摩尔比0.5～1.5:3:4加入到四氢呋喃溶液中，在0℃～100℃的温度下反应24h，将反应液纯化得到目标化合物VI。

3.如权利要求2所述的水溶性硫化氢荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤三中所述的全乙酰基保护叠氮糖为1-叠氮半乳糖四乙酸酯。

4.如权利要求2所述的水溶性硫化氢荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤一中所述的摩尔比为1:2:2:3:5，步骤一中所述的反应温度为50℃，步骤二中所述的反应温度为70℃，步骤二中所述的反应时间为24h，步骤三中所述的摩尔比为1:2:1:2，步骤三中所述的反应温度为70℃，步骤四中所述的反应温度为60℃，步骤五中所述的摩尔比为1:3:4，步骤五中所述的反应温度为70℃。

5.一种硫化氢检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将权利要求1中的水溶性硫化氢荧光探针配置成10mM的母液，然后取所述母液1μL加入到一定体积的水里，稀释成为0μM-50μM的不同浓度的荧光探针检测液；

步骤二：将待检硫化氢样品水溶液加入到所述荧光探针检测液中，根据不同浓度的硫化氢与荧光探针反应产生的荧光强度的不同从而被荧光检测器捕捉，进而得到样品浓度。

6.一种水溶性硫化氢荧光探针在水质硫化物检测中的应用，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1中的水溶性硫化氢荧光探针配置成10μM的荧光试剂，取待测水样1ml，加入到比色管中，加入所述荧光试剂0.1～0.5mL和浓度为10％的酸化试剂0.1～0.5mL，震荡静置5分钟，使用荧光检测仪获得荧光强度数据，参照硫化氢浓度与荧光强度数值之间的关系数据，即得到待测水样中水质硫化物的浓度。

7.如权利要求6所述的水溶性硫化氢荧光探针在水质硫化物检测中的应用，其特征在于，所述酸化试剂为盐酸。

8.一种水溶性硫化氢荧光探针在细胞硫化氢检测中的应用，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1中的水溶性硫化氢荧光探针配置成10mM的母液，然后取所述母液1μL加入到一定体积的水里，稀释成为0μM-50μM的不同浓度的荧光探针检测液；将所述荧光探针检测液与细胞在37℃温度下孵化5-30分钟，根据不同浓度的硫化氢与荧光探针反应产生的荧光强度的不同从而被荧光检测器捕捉，进而得到样品浓度。

9.如权利要求8所述的水溶性硫化氢荧光探针在细胞硫化氢检测中的应用，其特征在于，所述孵化时间为10分钟。