[发明专利]表皮细胞培养基和基于同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞的方法及应用

说明书

本发明提供了一种表皮细胞培养基和基于同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞的方法及应用，涉及细胞工程领域。该表皮细胞培养基主要由基础培养基、bFGF和EGF组成，并且含有血小板裂解液，能够使培养的表皮细胞有稳定的细胞形态和良好的细胞活性。基于同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞的方法利用成纤维细胞和表皮细胞在组织培养时迁出时间的差异，分别消化后传代，并添加不同的培养基，从而实现了直接从同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞，提高了组织的利用率，缓解了现有技术中存在的缺少一种从同一块组织中制备成纤维细胞和表皮细胞的方法的问题。

技术领域

本发明涉及细胞工程领域，尤其是涉及一种表皮细胞培养基和基于同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞的方法及应用。

背景技术

人类皮肤成纤维细胞和皮肤表皮细胞，是组成人类皮肤的两种重要细胞。皮肤成纤维细胞具有分泌胶原蛋白，弹性纤维等多种细胞外基质的功能，对维持皮肤弹性防止皮肤松弛和褶皱有着重要作用。皮肤表皮细胞具有分泌角蛋白的作用，是机体免受病原体感染的第一道防线。因此这两类细胞在医疗整形美容，皮肤损伤修复领域有着广泛的应用。除此之外，皮肤成纤维细胞和表皮细胞作为体外研究模型，在药物毒理实验，药物筛选和人工皮肤研制中发挥着重要的作用。

目前分离人类皮肤成纤维细胞和皮肤表皮细胞的方法，主要是组织块法和酶消化法。组织块法是将皮肤组织剪碎，并接种在培养皿中，待皮肤成纤维细胞或者表皮细胞迁出后，消化并纯化细胞，最终得到皮肤成纤维细胞或者皮肤表皮细胞。而酶消化法，是将皮肤组织用胰酶或者胶原酶消化为单个细胞，将细胞悬液接种于培养皿，由于皮肤成纤维细胞是细胞培养的优势细胞，培养物最终以成纤维细胞为主。因此，这两种传统的细胞分离方法一次只能从一个皮肤组织中分离的得到一类细胞，即一次从皮肤组织中分离出成纤维细胞或表皮细胞，无法同时制备这两类细胞，造成皮肤材料的浪费。

尤其在组织工程研究和应用中，种子细胞需要是来自同一个体，传统的方法需要手术取出两块皮肤组织或取出一块较大的皮肤组织，分别分离皮肤成纤维细胞和皮肤表皮细胞，一方面造成皮肤组织浪费，一方面需要增加了手术伤口的大小，使伤口愈合缓慢，有留下疤痕的风险。因此从同一块组织中制备成纤维细胞和皮肤表皮细胞的方法是目前需要的。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种表皮细胞培养基，该表皮细胞培养基培养得到的表皮细胞具有稳定的细胞形态和良好的细胞活性。

本发明的第二目的在于提供一种基于同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞的方法，缓解了现有技术存在的缺少一种从同一块组织中制备成纤维细胞和皮肤表皮细胞的方法的问题。

本发明的第三目的在于提供上述表皮细胞培养基，或上述基于同一块组织制备成纤维细胞和表皮细胞的方法在组织工程中的应用。

为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种表皮细胞培养基，所述表皮细胞培养基包含基础培养基、bFGF和EGF；

所述基础培养基包括血小板裂解液。

优选地，所述基础培养基包括高糖DMEM/F 12；

优选地，按照体积百分比计，所述基础培养基包括90％～95％的高糖DMEM/F12和5％～10％的血小板裂解液；

更优选地，按照体积百分比计，所述基础培养基包括92.5％～95％的高糖DMEM/F12和5％～7.5％的血小板裂解液；

进一步优选地，按照体积百分比计，所述基础培养基包括95％的高糖DMEM/F12和5％的血小板裂解液；

优选地，所述表皮细胞培养基中bFGF的质量体积浓度为8～12ng/ml；优选为9～11ng/ml；更优选为10ng/ml；