[发明专利]一种羊膜间充质干细胞的制备方法

说明书

本发明公开了一种羊膜间充质干细胞的制备方法，属于干细胞制备领域。所述羊膜间充质干细胞的制备方法，所述制备方法包括：向羊膜组织块中加入清洗液并进行离心，得到组织沉淀物；将组织沉淀物涂抹在容器内，并进行烘干，得到烘干的组织沉淀物；将烘干的组织沉淀物经过培养、分离和消化，得到羊膜间充质干细胞。该方法通过清洗液能够洗掉羊膜组织块上的粘液，从而避免粘液影响羊膜组织块在容器内的生长，通过离心能够将羊膜组织块与清洗液有效分离，从而避免清洗液影响羊膜组织块在容器内的生长，将离心后的组织沉淀物进行适度烘干能够提高原代细胞的产量，通过该制备方法收获的原代细胞数量多且纯度高。

技术领域

本发明涉及干细胞制备领域，特别涉及一种羊膜间充质干细胞的制备方法。

背景技术

羊膜位于胎盘的最内层，主要由来源于外胚层的上皮细胞和来源于中胚层的间充质干细胞构成。从羊膜中可以分离出原代羊膜间充质干细胞，原代羊膜间充质干细胞经过培养扩增和诱导分化，可以形成神经细胞或软骨细胞等，可见羊膜间充质干细胞具有广泛的医用前景。

现有的获得原代羊膜间充质干细胞的方法为组织块贴壁法，该组织块贴壁法是将羊膜剪碎，得到组织块，将组织块放入培养瓶中，拧松瓶盖后，将培养瓶放在超净工作台上，干燥1～2小时后，向培养瓶中加入培养液培养，隔日换液。

现有的组织块贴壁法所获得的原代羊膜间充质干细胞的细胞数量较少，不利于羊膜间充质干细胞的广泛应用。

发明内容

为了解决现有技术中获得的原代羊膜间充质干细胞数量较少的问题，本发明实施例提供了一种羊膜间充质干细胞的制备方法。所述技术方案如下：

本发明提供了一种羊膜间充质干细胞的制备方法，所述制备方法包括：

向羊膜组织块中加入清洗液并进行离心，得到组织沉淀物；

将所述组织沉淀物涂抹在容器内，并进行烘干，得到烘干的组织沉淀物；

将所述烘干的组织沉淀物经过培养、分离和消化，得到所述羊膜间充质干细胞。

具体地，所述离心的离心力为400～600g，所述离心的时间3～5min。

具体地，所述烘干的温度为37℃，所述烘干的时间为30～60min。

具体地，所述清洗液为含有浓度为1％的双抗的磷酸缓冲盐溶液或含有浓度为1％的双抗的生理盐水。

具体地，所述培养的方法包括：向涂抹有所述组织沉淀物的容器内加入培养液，并将所述容器置于37℃下静置培养，培养至第3天补加所述培养液，培养至第7天或第8天更换所述容器内的培养液，继续培养至得到原代细胞。

进一步地，所述培养液为含有浓度为10％的血清替代物(EliteGroTM-Advanced)的最低必需培养液(Minimum Eagle’s Medium，a-MEM)或含有浓度为10％的血清替代物的高糖培养液(Dulbecco’s Modified Eagle Media，D-MEM)。

进一步地，所述分离的方法包括：通过显微镜去除所述羊膜组织块和所述上皮细胞集落，保留所述羊膜间充质干细胞。

进一步地，所述消化的方法包括：向所述保留的羊膜间充质干细胞中加入消化液，得到纯净的所述羊膜间充质干细胞。

具体地，制备所述羊膜组织块的方法包括：将羊膜清洗干净，将干净的所述羊膜剪碎，得到所述羊膜组织块。

具体地，所述羊膜组织块的大小为0.5～1.5mm²。