[发明专利]一种使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法及由该方法制得的固定化脂肪酶在审
| 申请号： | 201910499472.9 | 申请日： | 2019-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN110241107A | 公开（公告）日： | 2019-09-17 |
| 发明（设计）人： | 胡云峰;朱衡;张云;孙爱君 | 申请（专利权）人： | 中国科学院南海海洋研究所 |
| 主分类号： | C12N11/08 | 分类号： | C12N11/08 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 刘明星;朱聪聪 |
| 地址： | 510301 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 固定化脂肪酶 氨基载体 氨基树脂 环氧基团 脂肪酶 保存稳定性 操作稳定性 游离脂肪酶 表面氨基 共价结合 固定化酶 酶学性质 热稳定性 共价键 固定化 交联剂 新方向 活化 制备 应用 发现 研究 | ||
1.一种使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将氨基树脂载体与环氧双功能交联剂溶液混合，进行交联反应，抽滤，去除残留的交联剂，得到活化载体；将活化载体和脂肪酶溶液混合均匀，进行固定化反应，抽滤，去除残留酶液，得到固定化脂肪酶。
2.根据权利要求1所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的氨基树脂载体为LX-1000EA或LX-1000HA。
3.根据权利要求1所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的环氧双功能交联剂为聚乙二醇二缩水甘油醚、乙二醇缩水甘油醚或新戊二醇二缩水甘油醚。
4.根据权利要求1、2或3所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的环氧双功能交联剂溶液是质量分数为0.75％的环氧双功能交联剂溶液。
5.根据权利要求1、2或3所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的交联反应条件为：温度30～35℃，反应时间为2～3h。
6.根据权利要求1、2或3所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的将活化载体和脂肪酶溶液混合均匀是按照活化载体：脂肪酶＝(0.5～1.25)g:800U的比例混合。
7.根据权利要求1、2或3所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，所述的固定化条件为：温度45～55℃，反应时间为1～2h。
8.根据权利要求1或3所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将干燥的LX-1000EA氨基树脂载体与质量分数为0.75％的环氧双功能交联剂溶液按质量:体积为＝1.25g:10mL的比例混合，于35℃摇床振荡进行载体交联反应3h，抽滤，去除残留的交联剂，得到活化载体；使用pH9.0的磷酸盐缓冲溶液配制浓度为2mg/mL的脂肪酶溶液，按照活化载体：脂肪酶＝1.25g:800U的比例将活化载体和脂肪酶溶液混合均匀，于55℃摇床振荡固定化1h，抽滤，去除残留酶液，得到固定化脂肪酶。
9.根据权利要求1或3所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将干燥的LX-1000HA氨基树脂载体与质量分数为0.75％的环氧双功能交联剂溶液按质量:体积为＝0.5g:10mL的比例混合，于30℃摇床振荡进行载体交联反应2h，抽滤，去除残留的交联剂，得到活化载体；使用pH7.0的磷酸盐缓冲溶液配制浓度为2mg/mL的脂肪酶溶液，按照活化载体：脂肪酶＝0.5g:800U的比例将活化载体和脂肪酶溶液混合均匀，于45℃摇床振荡固定化2h，抽滤，去除残留酶液，得到固定化脂肪酶。
10.根据权利要求1-9任一所述的使用氨基树脂固定化脂肪酶的方法制得的固定化脂肪酶。
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