[发明专利]基于hsa-miR-320a的糖尿病早期预警和/或诊断试剂盒的制备方法

说明书

本发明“基于hsa‑miR‑320a的糖尿病早期预警和/或诊断试剂盒的制备方法”，属于分子医药及代谢性疾病的诊断、预防和治疗领域。用于诊断和/或早期预警糖尿病的生物标志物包括：含有hsa‑miR‑320a在内的序列片段；所述hsa‑miR‑320a如SEQ ID No.1所示。所述用于诊断和/或早期预警糖尿病的试剂盒包括用于定量检测所述的生物标志物的试剂。测定本发明的生物标志物和/或采用本发明的试剂盒可高效准确地诊断出糖尿病，并进行相应的糖尿病早期预警与风险评估。

技术领域

本发明属于分子医药及代谢性疾病的诊断、预防和治疗领域，具体涉及一种基于hsa-miR-320a的糖尿病早期预警和/或诊断试剂盒的制备方法。

背景技术

microRNA(miRNA,miR)是一类新近发现的来源于内源性发夹结构转录本的长度大约为22个核苷酸的内源性小分子非编码单链RNA，通过与靶mRNA的3’非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)特异性结合，促进靶mRNA降解，或者抑制靶mRNA翻译，降低编码蛋白质水平，从而实现对基因转录后的表达调控。miRNA与机体的多种疾病联系紧密，包括神经退行性疾病、心脏病、肾病以及肿瘤等。近年来的研究发现，miRNA在糖脂代谢、胰岛素抵抗调控中均有着重要作用。

糖尿病(diabetic mellitus,DM)是严重威胁人类生命健康的重大疾病，目前其全球患病率为4.4％-17.9％，给患者和社会带来了沉重的负担。根据流行病学统计，2011年全球糖尿病患者人数已达3.7亿，其中80％在发展中国家，当年全球共有460万人死于糖尿病，当年全球糖尿病的医疗花费高达4650亿美元。在我国，近30年来糖尿病患病率显著增加。2013年，最新的流行病学调查研究警示，我国成年人糖尿病患病率为11.6％(约1.1亿)，糖尿病前期的患病率高达50.1％(约4.9亿)。

90％以上的糖尿病患者为2型糖尿病，是由胰岛素抵抗和β-细胞功能衰竭等引起的严重糖脂代谢紊乱的状态，并最终导致心脑血管系统和肾脏等多种严重并发症甚至死亡。已有的研究表明，胰岛素抵抗是由多种遗传及环境因素相互作用所导致的糖脂代谢紊乱，包括胰岛素信号传导通路缺陷、胰岛素作用靶点表达异常、与其他激素系统的交叉作用及其他代谢通路失衡等。然而其具体病理生理机制和分子信号网络还远未被完全认识和阐明。目前，糖尿病的药物治疗策略多基于纠正糖脂代谢紊乱，包括促进胰岛素分泌(磺脲类、格列奈类、DPP-4 抑制剂)和通过其他机制降糖的药物(双胍类、TZDs、α-糖苷酶抑制剂)。即使患者接受包括注射胰岛素在内的治疗方案，仍只有40％的患者血糖控制良好，而且，糖尿病所致的代谢障碍不能得到有效纠正，因此亟待研发新的治疗措施。另一方面，糖尿病的病因和危险因素并未完全阐明，因此需要寻找新的危险因素和采用更加有效的风险评估方法。

作为重要的内源性调控因子，miRNA广泛参与动植物体内的信号传导途径调控。尽管 miRNA的调控机制尚未完全阐明，已有的研究资料表明miRNA在糖脂代谢调控中起到重要作用，不仅可以作为糖尿病的新型诊断标志物，还参与调控糖尿病胰岛素抵抗及其并发症的发生发展。一系列研究发现，与对照人群相比，糖尿病患者外周血循环miRNA表达谱具有显著差异。miRNA-375在胰岛β细胞中特异性表达，并且能通过PI3K/PDK1/PKB等通路参与调控胰岛素的分泌，而miR-375敲除小鼠呈现出糖脂代谢紊乱的表型。全身或胰岛特异性高表达let-7b将导致糖耐量受损及胰岛素分泌减少。高糖状态下，miR-503在内皮细胞中表达增高，并通过Cdc25A和CCNE1介导参与糖尿病血管功能的调控。

RNA干扰技术作为具有突破性临床应用前景的生物技术，从出现开始的短短数年间就有多个产品进入临床试验，获得了巨大的成功。如发明专利201210069179.7中所披露，本发明的申请人在前期研究工作中发现miR-320a在动脉粥样硬化性疾病中具有预测作用，并研究确定了miR-320a的反义序列anti-miR-320a在动脉粥样硬化性疾病中的治疗作用。但本领域尚未发现miR-320a与糖尿病的关系，现有技术在糖尿病的分子诊断和分子治疗方面也缺乏行之有效的产品或药物。