[发明专利]一种树突状细胞的制备方法及应用

权利要求书

1.一种树突状细胞的制备方法，包括以下步骤：

1)将人类白细胞抗原和KRAS突变的融合基因连接到哺乳动物表达载体，得到重组质粒；

2)利用步骤1)所述重组质粒电击转化外周血来源的DC，得到重组细胞；

3)诱导步骤2)所述重组细胞成熟，得到成熟的树突状细胞；

步骤1)所述KRAS突变为KRAS-G12D；所述人类白细胞抗原为HLA-A*02:01；

步骤1)中所述融合基因对应的融合蛋白序列如SEQ ID NO：4所示，具体为：GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLTLRWATNFSLLKQAGDVEENPGPTEYKLVVVGADGVGKSALTIQ。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述重组质粒的浓度为5～20μg/mL。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述电击转化采用的电极的间距为2～3mm。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤2)所述电击转化的电压为100～350V。

5.权利要求1～4任意一项所述制备方法制备得到的树突状细胞。

6.权利要求5所述树突状细胞在制备提高KRAS突变抗原的提呈效率的药物和制备靶向KRAS突变的细胞毒性T淋巴细胞中的应用。