[发明专利]一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器及其制备方法

权利要求书

1.一种检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将剥离的硫化钨修饰到预处理后的电极表面；

(2)将聚多巴胺修饰于步骤(1)处理后的电极表面；

(3)将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰于步骤(2)处理后的电极表面；

(4)在乙酰辅酶A存在的条件下，组蛋白乙酰转移酶催化底物肽发生乙酰化反应，得到含有辅酶A的催化反应液；

(5)将含有辅酶A的催化反应液滴加到步骤(3)处理后的电极表面，利用(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯的马来酰亚胺与辅酶A的巯基之间的特异性结合作用，将催化反应液中的辅酶A修饰到电极表面；

(6)利用辅酶A中的磷酸根与phos-tag-biotin之间的特异结合作用，将phos-tag-biotin修饰到步骤(5)处理后的电极表面；

(7)利用phos-tag-biotin与streptavidin之间的特异结合作用，将streptavidin修饰到步骤(6)处理后的电极表面，制备得到检测组蛋白乙酰转移酶活性的光电化学生物传感器。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，将剥离的硫化钨修饰到预处理后的电极表面的方法为：

将剥离的硫化钨加入到二次水中，超声分散，制成浓度为0.5-5mg/mL的硫化钨分散液；将硫化钨分散液滴加到预处理后的电极表面，红外灯下照射干燥。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述剥离的硫化钨由如下方法制备得到：

将硫化钨和聚丙烯酸溶解在水中，超声分散，得到分散体；将分散体在2000-10000rpm离心5-30min，收集上清液；将上清液在5000-10000rpm离心5-30min，洗涤，真空干燥。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，将聚多巴胺修饰于步骤(1)处理后的电极表面的方法为：

将聚多巴胺加入到二次水中，超声分散，制成浓度为0.5-5mg/mL的聚多巴胺分散液；将聚多巴胺分散液滴加到步骤(1)处理后的电极表面，红外灯下照射干燥。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯修饰于步骤(2)处理后的电极表面的方法为：

将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯用DMSO溶解制成0.5-5mg/mL的(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液；将(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液滴加到步骤(2)处理后的电极表面，室温和潮湿条件下反应1.5-4小时。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，反应的温度为20-50℃，反应的时间为1-5h。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述底物肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

8.权利要求1-7任一项所述的方法制备的光电化学生物传感器。

9.权利要求8所述的光电化学生物传感器在检测组蛋白乙酰转移酶活性的应用。