[发明专利]酶法反应组合物、增加酶法反应中三磷酸腺苷(ATP)量的方法及其应用

权利要求书

1.一种增加酶法反应中的三磷酸腺苷(ATP)的量的方法，其特征在于在进行酶法反应时加入生产单磷酸腺苷(AMP)的第一酶或酶组以及腺苷，以新增三磷酸腺苷(ATP)的量，其中所述酶法反应的反应底物包含三磷酸腺苷(ATP)或其盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法还包括在加入第一酶或酶组的同时、之前或者之后，加入负责三磷酸腺苷(ATP)再生的第二酶或酶组。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于在加入第一酶或酶组和/或加入第二酶或酶组的同时、之前或者之后，加入第三酶或酶组。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于所述的第一酶或酶组包含腺苷激酶(AK)。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于所述反应底物还包含多聚磷酸或其盐以及辅助离子中的至少一者，

所述辅助离子优选镁离子、钠离子、钾离子和氯离子中的至少一者，更优选为镁离子和钾离子中至少一者；辅助离子可为其无机盐或有机盐的状态，优选为六水氯化镁、氯化钠、氯化锰、硫酸镁和碳酸钾中的至少一者，更优选为六水氯化镁、氯化钠和碳酸钾中的至少一者。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的第二酶或酶组包含多聚磷酸:AMP磷酸转移酶(PAP)、多聚磷酸激酶(PPK)和腺苷酸激酶(ADK)中的至少一者；或者

所述第三酶或酶组包含肌酸激酶(CK)、谷氨酸激酶(GK)、輔酶I激酶(NK)和/或以三磷酸腺苷(ATP)为其中之一底物以进行氨基酸、肽或蛋白的磷酸化、磷酸转移或多肽合成的其他酶或者酶组。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述酶法反应包括下列中的至少一者：

(i)所述的第一酶或酶组包含腺苷激酶(AK)，反应底物包含腺苷、多聚磷酸和三磷酸腺苷(ATP)，并且反应产物包含单磷酸腺苷(AMP)和二磷酸腺苷(ADP)；

(ii)所述的第一酶或酶组包含腺苷激酶(AK)，并且第二酶或酶组包含多聚磷酸:AMP磷酸转移酶(PAP)，反应底物包含单磷酸腺苷(AMP)和多聚磷酸，并且反应产物包含二磷酸腺苷(ADP)和多聚磷酸；

(iii)所述的第一酶或酶组包含腺苷激酶(AK)，并且第二酶或酶组包含腺苷酸激酶(ADK)，反应底物包含二磷酸腺苷(ADP)和多聚磷酸，并且反应产物包含单磷酸腺苷(AMP)和三磷酸腺苷(ATP)；

(iv)所述的第一酶或酶组包含腺苷激酶(AK)，并且所述的第二酶或酶组包含多聚磷酸激酶(PPK)，反应底物包含二磷酸腺苷(ADP)和多聚磷酸，并且反应产物包含三磷酸腺苷(ATP)和多聚磷酸；以及

(v)所述的第一酶或酶组包含腺苷激酶(AK)，第二酶或酶组包含多聚磷酸:AMP磷酸转移酶(PAP)、多聚磷酸激酶(PPK)和腺苷酸激酶(ADK)并且所述的第三酶或酶组包含肌酸激酶，反应底物包含肌酸和三磷酸腺苷(ATP)，并且反应产物包含磷酸肌酸、二磷酸腺苷(ADP)和多聚磷酸；

(vi)利用多聚磷酸:AMP磷酸转移酶(PAP)、腺苷酸激酶(ADK)和多聚磷酸激酶(PPK)的全部或至少一者、腺苷激酶(AK)和以三磷酸腺苷(ATP)为反应底物在同一反应体系中以混合、并联或串联的方式同时进行反应或在不同的反应体系中分别进行反应；

(vii)只利用多聚磷酸:AMP磷酸转移酶(PAP)、腺苷激酶(AK)和多聚磷酸激酶(PPK)的全部或至少一者和以三磷酸腺苷(ATP)为反应底物在不同的反应体系中以混合、并联或串联的方式同时进行反应或在不同的反应体系中分别进行反应；和

(viii)只利用腺苷激酶以腺苷为底物生产单磷酸腺苷(AMP)，以新增三磷酸腺苷(ATP)。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述的第二酶或酶组分别将单磷酸腺苷(AMP)和二磷酸腺苷(ADP)再生至二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)；以及

任选地，所述第一酶或酶组将腺苷合成至单磷酸腺苷(AMP)。