[发明专利]一种长效重组人生长激素融合蛋白及其工程细胞

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，特别是基因重组长效人生长激素技术领域，具体涉及一种长效重组人生长激素融合蛋白及其工程细胞，本发明的长效重组人生长激素融合蛋白rhGH‑Fc可以延长血清半衰期，增加蛋白在体内的生物活性，降低蛋白的免疫原性，从而改善药效，大大降低治疗时间内所需的注射给药频率，从而提高患者的依从性、增加医患双方的便利性；本发明构建的表达rhGH‑Fc的工程细胞具有蛋白表达量高、生物活性好的特点，特别适用于工业化大规模制备基因重组长效人生长激素。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是基因重组长效人生长激素技术领域，具体涉及一种长效重组人生长激素rhGH-Fc融合蛋白、其工程细胞及构建和筛选方法。

背景技术

人生长激素(Human Growth Hormone,hGH)是人类出生后促生长最重要的一种蛋白质类激素，其具有种属特异性，由人脑垂体前叶的嗜酸性细胞分泌，人生长激素的蛋白受体遍及全身各个部位，而并不是通过靶腺作用来产生生理学效应。人生长激素含有191个氨基酸分子，其中大部分是以分子量22KDa形式存在，等电点为4.9，在第53位的半胱氨酸与165位的半胱氨酸之间的以及第182位的半胱氨酸与189位半胱氨酸之间存在两个二硫键，少量生长激素以20KDa形式存在。生长激素最主要的生理作用是通过促进身体各组织、器官以及骨骼中受体细胞的蛋白质合成和脂肪的分解，进而促进人的代谢和生长发育。

若生长激素分泌不足会导致生长停滞及身体各功能紊乱，若分泌过多会引起不良反应，如出现“肢端肥大”、“巨人症”等。人生长激素最为明显的作用是增强蛋白质的合成、增强胶原蛋白的合成、促进骨组织的发育。虽然hGH对维持骨的生长十分重要，但是在骨生长中生长激素并非起直接作用，它是通过刺激血液中的硫化因子(SM)来实现的，SM可以促进身体内各种组织细胞及母细胞的分裂。人生长激素还可以促进氨基酸进入细胞中，减少氨类物质、含氮类物质的排出，保持机体的代谢状态平衡。人生长激素还能促使脂肪分解作用，抑制葡萄糖的氧化作用，减慢葡萄糖的消耗速度，还具有稳定糖原的作用。目前生长激素仍是一种非常复杂的激素，许多功能还有待研究。

人生长激素在临床上主要用于儿童生长激素缺乏症，Tuner综合症，促进大面积烧伤创面的愈合等。目前在中国，儿童生长发育迟缓发生率高达9.9％，居全球第二。根据中华医学会统计，目前全国4～15岁矮小患儿总数约有700万人，按其中的1/3为生长激素缺乏症推算，国内需要用生长激素治疗的儿童大概有200万，但能够接受合理治疗人数目前仍不到3 万人。对患者进行长期的随访时发现：约23％的儿童患者每个月会漏打三针以上；近13％的患者儿童会漏打处方剂量的一半以上；临床证据表明，没有严格遵守治疗方案患者可达50％以上。主要的原因是目前普通的重组人生长激素需要每日注射一次，以保持适当的血清生长激素水平。患者十分痛苦，治疗依从性差，并且价钱昂贵。对于那些需要长期接受生长激素治疗的病人，往往由于不能按时注射，造成治疗效果降低。目前在国内，重组人生长激素被批准的适应症主要有2种，其中大部分应用于治疗儿童“矮小症”，目前国内儿童矮小症患者治疗率很低，所以长效、高活性的重组人生长激素具有较大的未来市场潜力。