[发明专利]一种特异性结合铜离子和半胱氨酸的多肽荧光探针

权利要求书

1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.一种特异性识别Cu²⁺的多肽荧光探针P，其特征在于，所述的多肽荧光探针P由荧光发光物质与如权利要求1所述的多肽组成，所述荧光发光物质修饰在所述多肽的N端。

3.如权利要求2所述的多肽荧光探针P，其特征在于，所述的荧光发光物质为荧光素类、罗丹明类、香豆素类、喹啉类、萘酰亚胺、多芳基乙烯类中的任一种。

4.如权利要求3所述的多肽荧光探针P，其特征在于，所述的荧光发光物质为丹磺酰氯。

5.一种如权利要求2所述的多肽荧光探针P在检测Cu²⁺含量中的应用，其特征在于，所述的多肽荧光探针P与Cu²⁺ 以1:1配位结合，所述Cu²⁺的最低检测限为52nM，所述应用包括以下步骤：

(1)标准曲线的制备：向10mM，pH7.4的HEPES缓冲液中加入10^-5mol/L的多肽荧光探针P，再加入浓度为0.0，0.25，0.5，0.75，1.0，1.25μM的Cu²⁺，并检测波长为540nm处溶液的荧光强度，以Cu²⁺浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线；

(2)样品中Cu²⁺含量的测定：向10mM，pH7.4的HEPES缓冲液中加入一定浓度的待测样品，并检测540nm处溶液的荧光强度；

(3)计算待测样品中Cu²⁺的含量：将步骤(2)所得的荧光强度值带入步骤(1)制备的标准曲线中，计算出待测样品中Cu²⁺的含量。

6.一种如权利要求2所述的多肽荧光探针P在制备检测Cu²⁺的细胞成像试剂中的应用，其特征在于，所述多肽荧光探针P对Cu²⁺的最低检测限为52nM。

7.一种特异性识别Cys的多肽荧光探针P-Cu，其特征在于，所述多肽荧光探针P-Cu是由如权利要求2所述的多肽荧光探针P与Cu²⁺以1:1配位结合形成的配合物。

8.一种如权利要求7所述的多肽荧光探针P-Cu在检测Cys含量中的应用，其特征在于，所述多肽荧光探针P-Cu与Cys以2:1配位结合，所述Cys的最低检测限为43nM，所述应用包括以下步骤：

(1)标准曲线的制备：向10mM，pH7.4的HEPES缓冲液中加入10^-5mol/L的多肽荧光探针P-Cu，再加入浓度为0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2μM的Cys，并检测波长为515nm处溶液的荧光强度，以Cys浓度为横坐标，荧光强度为纵坐标，绘制标准曲线；

(2)样品中Cys含量的测定：向10mM，pH7.4的HEPES缓冲液中加入一定浓度的待测样品，并检测515nm处溶液的荧光强度；

(3)计算待测样品中Cys的含量：将步骤(2)所得的荧光强度值带入步骤(1)制备的标准曲线中，计算出待测样品中Cys的含量。

9.一种如权利要求7所述的多肽荧光探针P-Cu在制备检测Cys的细胞成像试剂中的应用，其特征在于，所述多肽荧光探针P-Cu对Cys的最低检测限为43nM。