[发明专利]一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体，其特征在于：

载体中包裹了用于蛋白质复合物分析的交联剂；以聚丙交酯-乙交酯为载体骨架；以双十二烷基二甲基溴化铵为骨架上的靶向驱动试剂；以蓖麻油聚氧乙烯醚为交联剂溶解剂，以二氯甲烷作为聚丙交酯-乙交酯的溶解剂；

所述的交联剂为：其两侧基团均为与蛋白上氨基反应的琥珀酰亚胺基团、卤代芳烃、亚胺酸酯；或均为与蛋白上巯基反应的马来酰亚胺基团、2-巯基吡啶、硫代磺酸盐、卤代乙酰基、吡啶基二硫化物；或均为与蛋白上羧基反应的碳化二亚胺、异氰酸盐；或均为与蛋白上糖链反应的酰肼基团；或均为与蛋白质中的氨基酸残基发生反应的非特异反应基团的苯基叠氮基团、双吖丙啶；所述的交联剂，其两侧基团分别为上述任一反应基团；

所述的琥珀酰亚胺基团为磺酸基-琥珀酰亚胺和羟基-琥珀酰亚胺中的一种或两种；所述的苯基叠氮基团为硝基苯叠氮基团和卤代苯叠氮基团中的一种或两种；

其中各组分的质量比为：

蓖麻油聚氧乙烯醚1-5质量份；聚丙交酯-乙交酯 10-50质量份；双十二烷基二甲基溴化铵1-2质量份；用于蛋白质复合物分析的交联剂1-10质量份；二氯甲烷100-800质量份。

2.如权利要求1所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体，其特征在于：所述聚丙交酯-乙交酯的分子量为5000-100000。

3.权利要求1-2任一项所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：载体通过聚合物乳液固化的方式制备：将蓖麻油聚氧乙烯醚、聚丙交酯-乙交酯、用于蛋白质复合物分析的交联剂、双十二烷基二甲基溴化铵溶于二氯甲烷中，形成混合物，将以上混合物倒入聚乙烯醇溶液中，并进行1-5分钟超声，超声结束后用聚乙烯醇溶液对载体进行固化。

4.如权利要求3所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的制备方法，其特征在于：所述的聚乙烯醇溶液为质量百分浓度为0.1%-5%的聚乙烯醇水溶液。

5.权利要求1所述的一种用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的应用，其特征在于：载体与细胞在1640培养液中进行共孵育，孵育1-12小时后，收集细胞，然后利用离子液体从细胞提取蛋白质和蛋白质复合物，采用膜上变性、还原、烷基化的方法对提取蛋白质和蛋白质复合物进行预处理。

6.如权利要求5所述的用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体的应用，其特征在于：对蛋白质复合物进行胞内交联后，进行样品预处理后，最后利用nano LC-MS/MS进行蛋白质组数据采集。

7.如权利要求1所述的用于细胞内蛋白质复合物原位分析的载体，其特征在于：用于鉴定的蛋白质复合物的来源为：细胞蛋白质提取液、胞浆蛋白质提取液、血浆蛋白质提取液、组织蛋白质提取液、单一蛋白质复合物中的一种或二种以上。