[发明专利]一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术

权利要求书

1.一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术，其特征在于，包括如下步骤：

S1：“红阳”猕猴桃芽的诱导培养，取猕猴桃果园取枝条或者叶片，通过表面消毒，在培养基上诱导出芽；

S2：“红阳”猕猴桃芽的增殖，对诱导得到的芽进增殖，扩大芽的数量；

S3：猕猴桃溃疡病病原菌的脱除，以增殖的芽为材料，在解剖镜下，分离芽尖分生组织，进行培养得到新芽，并对每个芽进行编号和增殖；

S4：无猕猴桃溃疡病病原菌的芽的筛选，细菌培养鉴定，将S3得到的各个芽的增殖材料进行研磨成浆，涂布在细菌培养基上，在生化培养箱中进行培养，观测有无细菌的生长，并以猕猴桃溃疡病病原菌为对照，进行比较，筛选出无细菌生长的芽；PCR鉴定，用无细菌生长的芽提取DNA，并作为PCR模板，用猕猴桃溃疡病病原菌DNA的特异引物进行PCR反应，再对PCR产物进行电泳分离，观测是否有猕猴桃溃疡病病原菌的特异产物，筛选出无特异产物的芽；

S5：扩繁无猕猴桃溃疡病病原菌的芽，对S4通过细菌培养和PCR方法筛选出来的无猕猴桃溃疡病病原菌的芽进行增殖，得到大量的芽；

S6：无猕猴桃溃疡病病原菌植株的再生，将S5扩繁得到的芽接种到生根培养基上进行生根，从而获得完整的无猕猴桃溃疡病病原菌植株；

S7：无猕猴桃溃疡病病原菌植株的驯化，将S6再生的植株在移栽到温室中进行适应性训练，一个月后，移到室外进行自然栽培，形成商品苗。

2.根据权利要求1所述的一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术，其特征在于，所述培养基包含MS培养基、1/2MS培养基、WPM培养基和B5培养基，所述培养基均在121℃下消毒15 min，每升含琼脂7g，蔗糖20g；调pH值至5.8-6.0之间，其中1/2MS培养基配置是将配置MS培养基的大量元素含量减半，每升添加蔗糖20g，其他含量相同，能够促进生根。

3.根据权利要求1所述的一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术，其特征在于，所述S1中，表面消毒在缓流自来水下，用洗涤剂清洗一次，冲洗一次，充分洗净后转入超净工作台中，分别在含1%有效氯的次氯酸钠溶液和含0.2%吐温20中消毒20和15 min，然后用无菌水漂洗3次。

4.根据权利要求1所述的一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术，其特征在于，所述培养的条件为：培养温度为25士1℃，光照强度为35-40 μmol/m^-2s^-1，光照时间为每天照明16小时，黑暗8小时进行培养。

5.根据权利要求1所述的一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术，其特征在于，所述S6中，生根操作时，选取生长健壮的扩繁得到的芽，在工作台中切下基部愈伤组织，保留顶芽部分，长2-3 cm，接种在生根培养基上，设置空白对照组进行生根试验，生根培养持续5周，期间观察记录生长情况。

6.根据权利要求1所述的一种“红阳”猕猴桃无溃疡病病原菌种苗培育技术，其特征在于，所述S7中，温室控制湿度80%左右、温度24-28℃、光照70%自然光；适应性训练，打开瓶盖进行炼苗，3天后从培养瓶中取出扩繁得到的芽，并在自来水下轻柔清洗根部粘着的培养基，移栽到盛有合适基质的塑料盆中，套上留有透气孔的塑料袋，一周后摘除，基质由4:3:3的田园土、泥炭土和河沙组成，温室内温度为23-27℃ ,湿度为60-80%，扩繁得到的芽移栽时浇足水，后续浇水时等基质表面稍干时再浇，对出现萎蔫的芽及时补水。