[发明专利]结肠癌的预后预测诊断用基因标记物及其用途

说明书

本发明涉及结肠癌预后预测诊断用基因标志物及其用途。本发明首次证实了PTBP3在结肠癌中表达的高低与患者预后直接相关，高表达PTBP3的结肠癌患者与低表达PTBP3的患者相比，生存时间显著减少。通过检测PTBP3转录水平的表达情况，可以预估结肠癌患者的预后情况，从而制备含有检测PTBP3基因试剂的结肠癌预后评价试剂盒，可以更加精准、更加客观的评判患者预后。

技术领域

本发明涉及分子生物学、临床预后判断领域，尤其涉及结肠癌的预后预测诊断用基因标记物及其用途。

背景技术

结肠直肠癌(CRC)，也被称为结肠癌或大肠癌，在美国是第五最常见的癌症形式，在中国是第四常见癌症而在欧洲是引起癌症相关死亡的第三主要原因。在世界范围内，疾病发生率在男性中排名第三位，死亡率第四位，在女性疾病发病率中排名第二位，死亡率达第三位。近年来，我国结直肠癌的发病率呈逐年上升的趋势。事实上，CRC通常是可治愈的，特别是在早期阶段被诊断时。在不同国家已采取若干筛查策略。常规CRC筛查测试包括粪便隐血测试(FOBT)、乙状结肠镜检、结肠镜检、气钡双重造影或直肠指检。它们都具有优点和局限性，但依从性仍低于预期，主要是由于后勤(logistics)或患者的不适。目前针对结直肠癌的治疗主要以手术为主，结合放疗化疗为辅的综合治疗方法。但目前结直肠癌的预后情况很差，术后存在生存率低、耐药性高或复发转移的情况，对病人及其家人身体及经济上带来很大的负担，严重影响着人们的生活水平和质量。

在临床实践中，目前结直肠癌的预后判断以病理学检查作为最重要和最可靠的预后指标，而分子标志物被认为是结直肠癌预后判断的新发展方向。目前，国内外研究者发现包括CD29、IGR5、CD44和β-catenin等基因在结直肠癌组织中存在异常表达的情况，对这些关键分子标志在患者中的表达量测量有望成为新的结直肠癌的预后判断方式。尽管如此，这些标志物的特异性和灵敏度仍有待改善，严重影响其在结直肠癌预后判断中的效能，因此仍未进入临床应用阶段。鉴于此，更加特异的结直肠癌预后判断分子标志物仍有待开发。

发明内容

本发明的目的是提供PTBP3在制备结肠癌预后预测产品中的应用。本发明的申请人通过对临床结肠癌病例组织样本中PTBP3表达检测，发现PTBP3结肠癌组织中高表达。结合这些临床病例的生存状况分析其与PTBP3表达的关系，证明PTBP3高表达与较差的总体生存率和无病生存率相关。由此本发明可以获得以下结论：PTBP3可作为结肠癌预后的特异标志基因，相比传统的检测手段，更快速、更特异、更灵敏、更准确，能够实现结肠癌的预后判断，从而降低结肠癌的死亡率。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了检测PTBP3表达的试剂在制备结肠癌患者预后预测产品中的应用。

进一步，所述试剂包括检测PTBP3的RNA转录水平的试剂、检测PTBP3的蛋白表达水平的试剂。

本发明对PTBP3的RNA转录水平的检测通过针对基因的PCR扩增来进行。需要从组织内分离mRNA和由mRNA合成cDNA的过程。为了分离mRNA，可以利用本领域公知的分离RNA的方法。cDNA合成过程可以以mRNA为模板，利用本领域公知的cDNA合成方法。本发明中mRNA测定可以利用本领域公知的方法进行，可以通过使用了由报告荧光色素和/或猝灭(quencher)荧光色素标记的探针的光学定量分析系统来测定。上述测定利用产业上销售的设备、例如ABI PRISM 7700TM、Sequence Detection System TM、罗氏分子生化公司的Lightcycler及其附属的软件等系统来进行。这样的测定数据以测定值或阈值循环(Ct或Cp)的形式表示。测定出的荧光值首次被记录为在统计学上有显著差异的值时的点为阈值循环，其与检测对象以PCR反应的模板的形式存在时的早期值呈反比例，因此，阈值循环值小的情况下，说明在定量上存在更多的检测对象。