[发明专利]造血祖细胞群体和富集其干细胞的方法

权利要求书

1.一种从已经被诱导而经历造血性分化的人胚胎干细胞或多潜能干细胞的群体富集造血祖细胞的干细胞群体的方法，所述方法包括：

a.诱导人胚胎干细胞或人诱导的多能干细胞群体中的造血性分化；

b.基于CD34和CD43的表达分选诱导的群体；

c.选择为CD34⁺CD43^-的细胞群体级分；

其中诱导造血性分化包括从分化的第2日至第4日但不在分化的第2日至第4日之前抑制活化素/nodal信号传导；和

其中所述分选和细胞级分选择在选自分化的约第6日至约第11日的一天进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其中造血性分化的诱导在无血清情况下实施。

3.根据权利要求1所述的方法，其中造血性分化的诱导在无间质情况下实施。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中造血性分化的诱导包括在第0日和第4日分化之间将群体与BMP4一起培养。

5.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中造血性分化的诱导包括在第1日和第8日分化之间将群体与bFGF一起培养。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中造血性分化的诱导包括在第3日和第13日分化之间或在第4日和第9日分化之间将群体与VEGF、DKK、IL-6和IL-11和/或它们的组合中至少一者一起培养。

7.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中造血性分化的诱导包括在第4日和第13日分化之间或在第6日和第9日分化之间将群体与SCF和EPO至少一者一起培养。

8.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中造血性分化的诱导包括在第6日和第13日分化之间或在第8日和第9日分化之间将群体与TPO、Flt-3和IL-3和/或它们的组合中至少一者一起培养。

9.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中造血性分化的诱导包括将群体与高达1ng/ml、优选地约0.3ng/mL和进一步优选地约0ng/mL活化素A一起培养。

10.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中抑制活化素/nodal信号传导包括将群体与活化素/nodal抑制剂一起培养。

11.根据权利要求10所述的方法，其中抑制剂是SB-431542。

12.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述选择在分化的约第7日和约第10日之间进行。

13.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述级分包含至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％造血祖细胞。

14.造血祖细胞群体，其使用根据权利要求1-13中任一项所述的方法获得。

15.根据权利要求11所述的方法，其中将所述群体与1μM至10mM之间、1μM至1mM或约6μM的SB-431542一起培养。