[发明专利]一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养基，其特征在于：所述培养基由以下组分及其浓度组成：马铃薯195~205g/L，蔗糖14~20g/L，玉米黄浆12~18g/L，L-谷氨酸钠1.0~2.0g/L，KH₂PO₄ 2.0~3.0g/L，K₂HPO₄ 1.3~1.7g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5~0.9g/L，CaCl₂0.7~1.0g/L，柠檬酸铁30~50mg/L，MnSO₄·H₂O40~60mg/L，植酸0.5~0.8g/L，L-脯氨酸160~200mg/L，苏氨酸100~150mg/L，四甲基戊二酸5.0~7.0mg/L，γ-氨基丁酸3.3~3.9mg/L，硝普钠0.3~0.7mg/L，氢化可的松30~50mg/L，LaCl₃90~110mg/L，氨基寡糖素2.5-3.3g/L，洋甘菊浸出液16~24ml/L，芹菜汁16~24ml/L。

2.根据权利要求1所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养基，其特征在于：所述洋甘菊浸出液的制备方法为：将洋甘菊与沸水按照50~100g:1L的比例水煎提取1~2h，然后以四层纱布过滤取滤液。

3.根据权利要求1所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养基，其特征在于：所述培养基的初始pH 值调节为7.0~7.4。

4.一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

a）菌种活化：将低温保存的生防芽孢杆菌菌种解冻复苏，然后划线接种于活化培养基上，32℃培养24h，转接2次备用；

b）种子液制备：用接种环挑取2~3个活化培养基上的单菌落接入装有种子培养基的三角瓶中，三角瓶装液量为35~50mL/250mL，在32℃、180r/min条件下振荡培养24h；

c）发酵培养：将种子液按照4~6%（v/v）的接种量接入盛有权利要求1所述培养基的三角瓶中，三角瓶装液量为180~200mL/1L，在转速为200~240r/min的条件下变温发酵培养36h；发酵结束后采用无菌水稀释所得发酵液，使菌体浓度达到1×10⁸~1×10⁹CFU/mL。

5.根据权利要求4所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养方法，其特征在于：所述生防芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌中的一种。

6.根据权利要求4所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养方法，其特征在于：所述活化培养基由以下组分及其浓度组成：牛肉膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，琼脂20g/L，pH7.0。

7.根据权利要求4所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养方法，其特征在于：所述液体种子培养基由以下组分及其浓度组成：葡萄糖8~12g/L，蔗糖7~9g/L，胰蛋白胨10~13g/L，L-谷氨酸钠2~4g/L，KCl 0.4~0.6g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4~0.6g/L，KH₂PO₄ 1~2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.1~0.2mg/L，MnSO₄·H₂O 4.3~4.7mg/L，生物素0.25~0.30mg/L，康多酚1.1~1.5mg/L，pH7.0。

8.根据权利要求4所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养方法，其特征在于：所述变温发酵培养是指0~24h发酵温度为32℃，25~36h发酵温度升高至37℃。

9.根据权利要求1-8所述的一种提高生防芽孢杆菌对植物病原真菌抑菌活性的培养基及培养方法，其特征在于：所述植物病原真菌是指尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、大丽轮枝菌（Verticillium dahlia）、灰葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）。