[发明专利]一种检测雌激素受体的电化学传感器及其应用

权利要求书

1. 一种检测雌激素受体的电化学传感器，其特征在于:该检测器基于3’-平末性DNAY-结构，在雌激素受体存在下，它能与修饰在电极表面的DNA Y-结构中的DNA特异性结合，使DNA不受外切酶III降解的影响，由于DNA Y-结构中含有G-四联体，在电极上加入血红素后，形成具有辣根过氧化物酶样活性的DNA模拟酶，会产生明显的电化学信号，从而实现了雌激素受体的定量检测；

其中，3’-平末性DNA Y-结构具体如下所示：

。

2.一种如权利要求1所述的电化学传感器的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：

(1)金电极预处理；

(2)将5-20μL含有0.2μM P1的DNA固定液滴定在预处理的金电极表面，在4℃条件下，孵育8-16小时，P1通过Au-S键组装在电极表面；

（3）金电极进一步用1 mM MCH溶液处理10-50分钟，然后用DNA杂交缓冲液冲洗；

(4)在37℃下，将含有1μM P3和1μM P2的DNA杂交缓冲液滴加在金电极表面1-3h，杂交后，用去离子水彻底冲洗电极，即可制得电化学传感器。

3.如权利要求2所述的电化学传感器的制备方法，步骤（1）金电极预处理，具体包括如下步骤：

a)金电极用氧化铝粉末抛光，得到抛光后的电极；

b)将步骤a)中抛光后的电极浸泡在水虎鱼溶液中2-20min消除吸附的有机物，并用去离子水彻底清洗；

c)再将电极用50%硝酸浸泡10-30min，然后分别用乙醇和去离子水处理电极2-8min，再用氮气吹干后，将电极浸入0.5 M硫酸中，用循环伏安法从0到1.6V进行扫描直到获得稳定的信号。

4.如权利要求2所述的电化学传感器的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中DNA固定液的用量为10μL；

步骤（3）中的处理金电极的时间为30分钟；

步骤（4）DNA杂交缓冲液中P3和P2的浓度比为1：1；

步骤（4）中DNA杂交缓冲液的用量为10μL。

5.如权利要求3所述的电化学传感器的制备方法，步骤b)中的水虎鱼溶液具体为V(H₂SO₄)：(30% H₂O₂)= 3：1。

6.如权利要求1所述的电化学传感器或权利要求2所述的电化学传感器的制备方法在检测雌激素受体方面的应用，具体步骤如下：

（1）将DNA Y结构修饰的金电极浸入含有雌激素受体的50-300μL DNA结合缓冲液中37℃浸泡50-100分钟；

（2）用PBS对电极进行彻底冲洗，并浸入30-80μl含有2U外切酶III的NE缓冲液I中，37℃孵育10-50分钟，然后，加入20mm EDTA以终止外切酶III反应后，用PBS缓冲液和去离子水对电极进行冲洗；

（3）在室温下将10μl新制备的含25 mM HEPEs、100μM氯化血红素、200 mM NaCl、12.5mM MgCl2和50 mM KCl的氯化血红素溶液滴到电极表面0.5-2 h，随后，使用电极进行测量；

（4）电化学检测：电化学阻抗谱（EIS）在5.0 m M的[Fe（CN）₆]^3-/4-含0.1M KCl中进行，频率在10^-1至10⁵ Hz范围内，在含有1.0 mM H₂O₂和0.2 mM HQ的5 ml 浓度为0.1M pH 7.4 的PBS中进行差分脉冲伏安法，扫描范围为-0.2至0.2 v。

7.如权利要求6中的应用，其特征在于：

步骤（1）中DNA结合缓冲液的体积为150μL；

步骤（1）中浸泡时间为30分钟；

步骤（2）中，NE缓冲液I的体积为50μL。