[发明专利]一种慢病毒载体冻存保护液的制备方法

说明书

本发明提供了一种慢病毒载体冻存保护液，包括以下体积分数的组分：含NaCl的Tris‑HCl缓冲溶液70‑93％，5‑20％的甘油，1‑6％的CD‑Lipid浓缩液，1‑8％的人血清白蛋白(HSA)溶液；其中，所述含NaCl的Tris‑HCL缓冲溶液中，Tris‑HCl的摩尔浓度为0.8‑20mM，NaCl的摩尔浓度为0.08‑0.15M；所述含NaCl的Tris‑HCl缓冲溶液的pH值为7.0‑8.0。该冻存液能在较低温下长期保存慢病毒载体而不影响其滴度，还能在使用过程中反复冻融以及在较长时间放置于室温下，仍然能够最大程度的保持慢病毒载体滴度。本发明还提供了冻存液的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种慢病毒载体冻存保护液及其制备方法和应用。

背景技术

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的基因治疗效果，在国外已经开展了广泛的临床研究，例如利用慢病毒载体制备CAR-T进行肿瘤免疫治疗，因此具有广阔的应用前景。

由于慢病毒含有类脂包膜，因此慢病毒载体的稳定性较低、容易失活。为了维持病毒载体结构的完整性，维持其生物滴度，慢病毒载体一般配制成液体于超低温(例如-80℃)下保存，或在低温冷冻条件下运输，并在使用前解冻。

慢病毒载体生物滴度的丧失多发生在保存阶段。慢病毒载体低温下保存，其主要挑战就是溶液降低到冰点过程中，以及在超低温保存阶段对对慢病毒结构性和功能性成分的破坏。另外，超低温保存的时间过长或反复冻融，都会导致慢病毒载体生物滴度(病毒滴度)大幅降低，从而限制了它的正常使用。

通常通过添加冻存保护剂来保存慢病毒的滴度，例如牛血清或培养基，但在培养基中冻存5个月的慢病毒的滴度急剧下降；但是牛血清保存的慢病毒，并不利于慢病毒的临床应用。也有针对慢病毒设计的冻干制剂配方，这类试剂虽能有效保存病毒载体的滴度，但试剂的成份复杂，制备较繁琐，并不利于慢病毒的临床应用，比如用于CAR-T制备。

因此亟需一种成分简单、能在较低温下长期保存慢病毒载体且不影响其滴度的冻存保护液。

发明内容

本发明提供了一种慢病毒载体冻存保护液及其制备方法，它能在较低温下长期保存慢病毒载体，维持其结构的完整性，不影响其滴度，还能在使用过程中反复冻融以及较长时间放置于室温，仍然能够保持较高的滴度。

本发明提供了一种慢病毒载体冻存保护液，包括以下体积分数的组分：70-93％含NaCl的Tris-HCl缓冲溶液，5-20％的甘油，1-6％的CD-Lipid浓缩液，1-8％的人血清白蛋白(HSA)溶液；

进一步地，所述含NaCl的Tris-HCL缓冲溶液中，Tris-HCl的摩尔浓度为0.88-10mM，NaCl的摩尔浓度为0.088-0.1M。

进一步地，所述含NaCl的Tris-HCL缓冲溶液中，Tris-HCL的摩尔浓度为10mM，NaCl的摩尔浓度为0.1M。

进一步地，所述含NaCl的Tris-HCl缓冲溶液的pH值为7.0-8.0

进一步第，所述5-20％的甘油。进一步优选为20％。

进一步地，所述CD-Lipid浓缩液的体积分数为1-5％。进一步优选为1％。

进一步第，所述人血清白蛋白(HSA)溶液的质量浓度为1-5％。进一步优选为1％。