[发明专利]一种蝉花虫草多糖、制备方法及在制备预防肾间质纤维化药物中应用

说明书

本发明公开了一种蝉花虫草多糖、制备方法及在制备预防肾间质纤维化药物中应用，将蝉花虫草子实体粉碎，过筛得到蝉花虫草子实体粉料；蒸馏水超声提取子实体粉料后进行超高压处理；处理后制备蝉花虫草子实体粗多糖；然后使用DEAE‑纤维素阴离子柱色谱分离，冷冻干燥后得到纯化多糖。本发明成功制备超高压处理修饰的蝉花虫草多糖，步骤简单，效率较高。通过对大鼠肾小球上皮细胞模型的干预发现，多糖可以有效抑制大鼠肾小球上皮细胞(HMC)的增殖，其在预防肾间质纤维化方面具有广阔的应用前景，蝉花虫草多糖抗氧化性得到明显提高，诱导了对高糖大鼠肾小球系膜细胞凋亡，而且对正常细胞无毒性，具有较好的研究价值和商业价值。

技术领域

本发明涉及一种虫生真菌的制备方法及应用，尤其涉及的是一种蝉花虫草多糖、制备方法及在制备预防肾间质纤维化药物中应用。

背景技术

蝉花虫草(Cordyceps cicadae)又称金蝉花，是由麦角菌科虫草属真菌蝉拟青霉寄生于蝉类若虫的干燥复合体，属于农产品中的虫生真菌，是我国传统的名贵中药材之一。蝉花虫草的记载历史比冬虫夏草早800年，某些活性成分比冬虫夏草还高。现代医学研究表明，蝉花虫草含有大量的虫草酸、虫草多糖、腺苷、多种生物碱及麦角甾醇等功能成分，具有改善肾功能、缓解慢性肾衰竭、调节脂代谢、解热镇痛、镇静催眠，增强机体免疫力，抗辐射和明目等作用，对慢性代谢疾病有一定的预防和辅助治疗效果。

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)为糖尿病常见并发症，是导致终末期肾脏疾病主要原因之一。研究结果表明，DN是典型衰老相关性疾病，肾脏多种固有细胞衰老和功能减退(对抗损伤的应激能力减弱)是DN各种病理损害加速进展的重要原因。糖尿病肾病的基本病理改变为细胞外基质聚集，基膜增厚，晚期出现弥漫性肾小球硬化，最终导致肾衰竭。在肾小球疾病中，系膜细胞是重要的靶细胞及效应细胞，是糖尿病肾病重要的病理改变。糖尿病肾病的一个主要特征是肾小球系膜细胞的早期增殖以及细胞外基质的增多，而肾小球系膜细胞增殖抑制剂可能具有潜在的治疗肾病的作用。而能够诱导高糖大鼠肾小球系膜细胞凋亡的药物，对肾脏具有一定的保护作用，可以在一定程度上缓解糖尿病肾病的症状。

真菌多糖是由10个分子以上的醛糖和酮糖通过糖苷键缩合而成，有的还结合蛋白质或多肽，广泛存在于真菌的子实体、菌核或菌丝体中。国内外大量研究表明，天然真菌多糖具有多种生物药理活性，如抗氧化、调节免疫、护肝保肾等活性，在国际上被称为“生物反应调节剂”，对疾病有着特殊的治疗效果。以天然真菌多糖为基础的多糖药物的研究，已成为生物化学与生物医学领域的一个研究热点，可以用于慢性代谢疾病的防治。但是国内外对蝉花虫草研究得并不深入，人工栽培、选育的品种较少，而且往往集中在蝉花菌丝活性的研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于：如何发掘新的调节肾功能、改善肾损伤的多糖类药物，提供了一种蝉花虫草多糖、制备方法及在制备预防肾间质纤维化药物中应用。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的，本发明的发明目的之一是公开了一种蝉花虫草多糖在制备预防肾间质纤维化药物中的应用。

一种蝉花虫草多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)将蝉花虫草子实体粉碎，过筛得到蝉花虫草子实体粉料；

(2)按照1:6～10的料液比加入蒸馏水超声提取，然后80～90℃水浴1.5～2.5h，多次过滤收集并合并上清液；

(3)将上清液进行超高压处理，压力为400～450MPa、超高压处理时间为10～15min,保持温度为20℃；

(4)将处理后的上清液浓缩后加入乙醇，离心收集沉淀，加水溶解沉淀后得到粗多糖水溶液；

(5)在粗多糖水溶液中加入同体积的Sevag试剂，磁力搅拌后离心收集上清液；重复至蛋白质完全去除，然后将多糖溶液浓缩，去除小分子，使用透析袋流水透析，旋蒸浓缩至浓稠状液体，真空冷冻干燥，即得蝉花虫草子实体粗多糖；