[发明专利]一种用于片形吸虫感染检测的标志物及试剂盒

说明书

本发明公开一种用于片形吸虫感染检测的标志物、引物和检测试剂盒。本发明的标志物是血清miRNA生物标志物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。本发明的片形吸虫病和片形吸虫感染检测试剂盒内包括有引物SEQ ID No.5、SEQ ID No.6和SEQ ID No.7。本发明具有组织样本较容易获取，来源方便性能稳定；通过实时定量PCR技术对片形吸虫感染的血清miRNA的检测，结果可信，方便操作。

技术领域

本发明涉及一种可用于检测寄生虫的标志物、用于制备扩增这一标志物的 引物，以及检测试剂盒，特别是一种用于片形吸虫感染检测的标志物、引物和 检测试剂盒。

背景技术

片形吸虫在分类上属于复殖目的片形科片形属吸虫。主要包括肝片形吸虫(Fasciola hepatica)和大片形吸虫(Fasciola gigantica)，是危害牛羊等 反刍兽和人类的寄生性蠕虫。其幼虫可寄生于人引发片形吸虫病 (fascioliasis)。片形吸虫呈世界性分布，尤其在温带及亚热带地区。我国 片形吸虫分布广泛，多呈地区性流行。牛羊等动物感染造成巨大的经济损失， 且威胁人类身体健康。

目前，对片形吸虫终末宿主感染的检测诊断及流行病学调查主要依赖于粪 便检查法和免疫学方法进行生前诊断。粪便检查适用于成虫期诊断，慢性患畜 常可检出虫卵，有水洗沉淀法和尼龙筛集卵法。免疫学方法目的在于检测抗体， 可用于童虫期诊断，有皮内变态反应、间接血球凝集试验和酶联免疫吸附试验 等。该方法具有较高的特异性和敏感性，解决了常规检测方法的一些缺陷如减 少污染周围环境及工作人员的危险等，但只能用于终末宿主的检测。对牛、羊 的急性型片形吸虫病的诊断，应以解剖检查为主，把肝脏切碎在水中挤压后淘 洗，可找到大量童虫。但这种检测方法存在一定的问题：需要捕杀大量的野生 动物和操作人员遭受感染和污染周围环境的风险。因此对片形吸虫病宿主感染 的早期检测与诊断对片形吸虫病的流行，维护人和动物的公共卫生健康等具有 重要作用。

发明内容

本发明提供一种用于片形吸虫感染检测的标志物、用于制备扩增这一标志 物的引物，以及检测试剂盒。

本发明的标志物是血清miRNA生物标志物，其中之一的序列为SEQ ID No.1，另一种的序列为SEQ ID No.2。

本发明用于制备SEQ ID No.1的反转录引物，其序列为SEQ ID No.3。

本发明用于制备SEQ ID No.2的反转录引物，其序列为SEQ ID No.4。

本发明用于制备SEQ ID No.1的特异引物，其序列为SEQ ID No.5。

本发明用于制备SEQ ID No.2的特异引物，其序列为SEQ ID No.6。

本发明用于制备SEQ ID No.1和SEQ ID No.2的通用引物，其序列为SEQ ID No.7。

本发明的血清miRNA生物标志物序列、所述任一引物均可在制备片形吸虫 病和片形吸虫感染检测试剂中应用。

本发明的片形吸虫病和片形吸虫感染检测试剂盒内包括有引物SEQ ID No.5、SEQID No.6和SEQ ID No.7。

优选地，本发明的片形吸虫病和片形吸虫感染检测试剂盒内还可以有引物 SEQID No.3和SEQ ID No.4。