[发明专利]一种半定量唾液中尿素酶活性的快速检测方法

说明书

本发明属于快速检测领域，涉及一种半定量唾液中尿素酶活性的快速检测方法，尤其是涉及一种利用唾液中尿素酶与尿素的反应产物引发相应指标变化来半定量唾液中尿素酶活性的方法。无需对唾液进行处理，只需将唾液加入到测试溶液中，利用唾液中尿素酶与尿素的反应产物引发测试溶液颜色变化，便可实现目视法半定量唾液中尿素酶的活性。相比于常规方式，本方法无需预处理过程、操作简便、便于携带运输且成本较低，具有较高的便捷应用性能。

技术领域

本发明属于快速检测领域，涉及一种半定量唾液中尿素酶活性的快速检测方法，尤其是涉及一种利用唾液中尿素酶与尿素的反应产物引发测试溶液颜色变化来半定量唾液中尿素酶活性的快速检测方法。

背景技术

唾液是一种无色无味、具有黏性的液体，由口腔中三对唾液腺(腮腺、颌下腺、舌下腺)与一些小唾液腺分泌的液体混合组成。唾液中含有多种物质，蛋白、有机酸、激素等有机物及钠、钾、镁等无机物占0.6％，水分占99.4％。其中，可离子化物质组成可调节唾液pH值，一般情况下，普通人唾液pH为6.0～7.9。

尿素酶是一种含镍的寡聚酶，可由口腔内可能含有的唾液链球菌、内氏放线菌、沃氏葡萄球菌、幽门螺旋杆菌等细菌产生。尿素酶能够引发多种人类疾病，与口腔相关的包括龋齿、牙周炎等，其它常见症状为胃炎、肾盂肾炎、尿路结石等。通常，口腔内的尿素酶被视为诊断性生物标志物，可用于评估早期口腔和全身疾病。

目前，尿素酶的检测方法主要有纳氏试剂比色法、拉曼光谱法、酚红指示剂法、胶体金免疫层析法、精密试纸法等。纳氏试剂含汞，拉曼光谱需使用硝酸银等有毒试剂且设备普及率较低，因此两种方法均未得到广泛应用。酚红指示剂法可以快速定性胃粘膜等活体组织中的尿素酶，暂时没有关于使用该方法检测唾液中尿素酶含量的相关研究。以胶体金免疫层析法为基础的唾液测试板、精密试纸法均可实现唾液中尿素酶的定性检测。但唾液中尿素酶的实际含量却鲜有研究。因此，建立一种唾液中尿素酶活性的快速半定量检测方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种半定量唾液中尿素酶活性的快速检测方法，利用唾液中尿素酶与尿素的反应产物引发测试溶液颜色变化的原理，只需将采集的适量唾液加入到测试溶液中，混匀后静置适当时间，便可实现目视法半定量唾液中尿素酶的活性的目的。

为了实现本发明的目的，本发明的技术方案如下：

a.使用塑料瓶采集不少于1mL唾液样本；

b.使用吸管将1mL唾液样本加入到测试溶液中，混匀，静置；

c.目视法观察测试溶液颜色变化，若5min内溶液呈现肉眼可见的紫红色，则表明尿素酶活性不低于0.8U/mL；若30min内，溶液呈现肉眼可见的紫红色，则表明尿素酶活性不低于0.5U/mL、不高于0.8U/mL；若17h内，溶液呈现肉眼可见的紫红色，则表明尿素酶活性不低于0.04U/mL、不高于0.5U/mL。在固定时间内，颜色越深则表示尿素酶活性越高。

最优的，测试溶液是1％酚酞乙醇溶液和7g/L尿素溶液按照1∶100的体积比制得的混合溶液，体积为10mL。

有益效果：本发明无需对唾液进行处理，只需将采集的适量唾液加入到测试溶液中，利用唾液中尿素酶与尿素的反应产物引发测试溶液颜色变化，便可实现目视法直观地半定量唾液中尿素酶的活性。相比于常规方式，本方法无需预处理过程、操作简便、便于携带运输且成本较低，具有较高的便捷应用性能。

具体实施方式

结合实施例对本发明做进一步说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所做出的任何变更或改进，均属于本发明的保护范围。

实施例一

采集来源于不同性别、年龄的健康人群的唾液样本，采集当日完成测试。结果表明，5min时，所有溶液均未发生显色，即所有唾液样本的尿素酶活性均低于0.8U/mL；放置17h时，仅3份溶液呈现肉眼可见的紫红色，与尿素酶活性为0.064U/mL时现象一致，说明仅三份唾液样品中尿素酶活性接近0.064U/mL，其余唾液样本中尿素酶活性均低于0.064U/mL。