[发明专利]一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种登革病毒（DENV）基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法。本发明还公开了一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法。本发明通过测试基片上染料分子ROX的拉曼信号，实现对于DENV基因片段的特异性、高灵敏检测。对于DENV基因片段检测，第一试剂、第二试剂、第三试剂和第四试剂中的C1、L1、L2、C2、H1和H2为针对DENV基因片段设计的核苷酸序列不同的DNA链。本发明公开的检测试剂盒制备简单、检测灵敏度高、特异性好，在登革病毒检测等领域有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测和光谱学检测领域，涉及一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

登革病毒属于黄病毒科，四种不同的登革病毒类型(dengue 1，2，3，4)都能感染人体，这些血清型登革病毒可在初次感染时引起轻微发热，并有可能发展为更严重的登革热出血热(DHF)和登革热休克综合征(DSS)，从而导致死亡。过去40年来，登革热/登革出血热(DEN/DHF)在全球范围内急剧蔓延，流行频率和规模都在增加，迫切需要采取更有效的监测、预防和控制措施。在DEN/DHF流行的大多数国家，没有适当的监测作为评估疾病负担的手段，也没有足够的蚊虫控制或疫苗预防方案，缺乏现有的、可负担的、灵敏的和具体的诊断测试是影响DEN/DHF监测的主要障碍。对登革热病人的早期诊断也是病人管理的关键，可以避免使用昂贵和无效的抗生素，快速将发热病人分类到适当诊所，降低保健费用。随着抗病毒治疗的快速发展，早期诊断将是确定登革热患者的关键，使他们尽快得到适当的照顾，病例的及时诊断也将有助于社区的病媒控制活动，从而减少其进一步传播。

逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和单克隆抗体捕获-酶联免疫吸附试验(MAC-ELISA)是目前世界范围内用于快速诊断登革病毒的实验室检测方法。然而两种方法都易产生假阳性结果。因此，生物传感检测方法因其简便、快速、灵敏等优势被应用于登革病毒的检测，表面增强拉曼散射(SERS)被称为超灵敏，功能强大且易于使用的基因检测工具，甚至能够实现单分子检测水平，且检测时只需少量样品，可提供具有非常窄特征峰的“指纹”光谱曲线，也在登革病毒检测领域取得了一定的进展。

杂交链式反应(HCR)和催化发夹组装(CHA)是两种经典的无酶核酸放大策略，这两种反应在提高无酶生物传感器的性能方面引起了人们的广泛关注。HCR是2004年Dirks和Pierce首次报道一种无酶的目标诱导信号放大策略，以单链DNA为触发链，可破坏长茎保护环的能量平衡，引发交替杂交链式反应，产生长的双链DNA。催化发夹组装(CHA)也是一种等温无酶核酸放大技术，目标DNA存在的情况下，可以促使两种发夹结构杂交形成双链结构，并释放出目标DNA循环使用。近年来，许多将反应物限制在紧密的空间中用以保持局部高浓度试剂和加速反应的模型被提出，在生物分析物检测中有广泛应用。

发明内容

发明目的：本发明所要解决技术问题是提供了一种登革病毒基因片段SERS检测试剂盒。

本发明还要解决的技术问题是提供了登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的制备方法。

本发明最后要解决的技术问题是提供了登革病毒基因片段SERS检测试剂盒的检测方法。