[发明专利]一种以叶茎及花序梗隐芽为外植体的姜科植物离体快速繁育的方法

说明书

本发明公开一种以叶茎及花序梗隐芽为外植体的姜科植物离体快速繁育的方法，取健壮、带花序的姜科植物叶茎，逐层剥去叶鞘，保留最内一层紧贴叶茎的叶鞘，将消毒、处理后得到的带隐芽的外植体，逐步移植于促隐芽萌发的诱导培养基、促薄片诱导不定芽的培养基、丛生芽增殖的培养基、生根培养基中培养，诱导其萌发、增殖、生根，并最终移栽至自然环境中。本发明方法首次确立了部分姜科植物存在隐芽，并建立了以隐芽作为外植体进行离体培养的技术；本发明方法操作简单，大大降低了姜科植物体外培育的污染率，提高了姜科植物离体快速繁殖的效率。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，涉及一种植物的组织培养方法，具体涉及一种以叶茎及花序梗隐芽为外植体的姜科植物离体快速繁育的方法。

背景技术

姜科是单子叶植物中的一个大科，全世界姜科植物有约50个属，1300多种，中国有约20个属，220个种，包含有重要的食用、药用和观赏用植物，如生姜、姜黄、姜花、草果、沙姜、高良姜、益智等，具有非常重要的经济价值。

姜科植物多为异花授粉，种子繁殖的后代不能保持母株的优良性状，且从播种至开花需要两年以上的时间，因此在生产中主要依靠块茎进行繁殖。但这种方式效率低，且容易受到自然灾害和虫害的影响，不足以为产业化应用提供足够的、优质的种苗。

组织培养技术由于能够保持母本的优良特性，且在人工控制的条件下培养，不会被天气、季节等因素限制，能够快速地生长、繁殖，因此在植物种苗繁育上有普遍的应用。

在姜科植物的离体快速繁殖体系建立中，常以根茎上的芽眼以及根茎萌发出的嫩茎为外植体。然而，采用这些部位为外植体存在着来源少、污染率高、诱导成活率低的问题；即便是采用操作繁复的多种无菌处理手段结合，无菌诱导成活率也常常在50％以下。无菌处理问题长期困扰着该科植物以营养器官作为外植体时的无菌体系建立，因此亟需开发一种新的无菌体系建立的方法。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种便于操作、有效降低污染率，实现姜科植物离体快速、高效繁育的方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种以叶茎及花序梗隐芽为外植体的姜科植物离体快速繁育的方法，包括如下步骤：

1)选取健壮、带花序的姜科植物叶茎，逐层剥去叶鞘，保留最内一层紧贴叶茎的叶鞘，以一个隐芽为中心将叶茎切成每段长为4～6厘米的茎段；

2)在无菌条件下，用75％酒精浸泡60～120秒后，无菌水冲洗3～4次，再用0.10％升汞溶液消毒10～20分钟，无菌水冲洗6～8次，将茎段两端切去，保留以隐芽为节位、上下长度约为0.4～0.6厘米的叶茎，拨开最后的叶鞘使隐芽显露，接种到促隐芽萌发的诱导培养基上；

3)将步骤2)中隐芽萌发成的小根茎，切为薄片，接种于促薄片诱导不定芽的培养基上，诱导出不定芽；

4)将步骤3)中获得的不定芽切分，接种于促丛生芽增殖的培养基，进行快速繁殖；

5)重复步骤4)3～4次，获取足够数量的增殖苗丛；

6)将步骤5)中获得的增殖苗丛切分为单个，接种于生根培养基；

7)将步骤6)中获得的装有生根无菌苗的瓶盖打开，置于温室，炼苗一周后移栽至泥炭：园土：粗砂＝1：1：1的土壤环境中继续种植。