[发明专利]鉴定大果紫檀的方法、引物和探针

说明书

本发明公开了红木中大果紫檀的PCR鉴定用的引物、探针和方法，以大果紫檀基因的序列位点多态性信息为依据，能准确、客观地获得大果紫檀的种属鉴定结果。本发明检测需要的样本量非常小，因此检测过程中不会破坏木材的外形结构。克服了传统鉴定法必须依赖于木材有完整易辨识的形态结构的缺点。本发明不仅能为执法过程提供准确的木材信息，对规范市场，保护消费者权益，促进物种资源的保护和利用具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及木材材种鉴定的分子生物学检测领域，具体地说涉及对大果紫檀的分子鉴定方法及其所使用的引物和探针。

背景技术

红木是紫檀属、黄檀属、柿属、崖豆属及决明属树种的心材，其构造特征、密度和材色(大气中变深的材色)符合《红木》GB/T 18107-2017标准规定要求的木材。新标准于2018年7月1日实施。经科学试验研究，共有5属8类29个树种。

大果紫檀(Pterocarpus macrocarpus Kurz)，俗称缅甸花梨，属蝶形花科紫檀属，其宏观特征为散孔材，半散孔材倾向明显。大果紫檀的主产地为：泰国、缅甸、老挝、柬埔寨和越南。按照新国家标准GB/T 18107-2017《红木》已将原越柬紫檀、鸟足紫檀并入大果紫檀，此后越柬紫檀和鸟足紫檀仅作为大果紫檀的别称。

近年来，由于红木家具受到越来越多消费者的喜爱，促进了红木家具制造业的繁荣，因此红木木材的进口量也随之逐年增加。但是，长期以来由于受利益驱使，红木市场良莠不齐，掺假造假情况突出：一方面用较次的红木冒充较好的红木，另一方面用非红木冒充红木等。

传统的红木鉴定主要依赖于形态鉴定方法，它必须建立在所检红木有完整易辨识的形态结构的基础上，这就为红木鉴定工作带来了一定的局限性。同时，相近种属红木易出现材质结构的相似，给红木鉴定的准确性带来困难。近年来研究工作者开发了基于数字图像处理的木材图像识别技术，大大提高了木材识别的准确性，推动了木材识别技术的发展。但是，基于计算机图像检索的识别技术依然没有脱离对木材本身的形态结构及特征的依懒性。

目前对大果紫檀的鉴定依然采用传统的木材鉴定手段，即解剖切片观察木材的构造以及形态特征从而得出判定结果。因此建立起分子鉴定方法，实现大果紫檀的简单、快速、准确、客观的鉴定是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明提供一种用于大果紫檀的PCR鉴定用的引物和探针，所述引物和探针序列包括：

DGZT Primer-F：5'-GCGAATCCCTCCTGCTTATTC-3'

DGZT Primer-R：5'-CAATTTATCTCTCTCAACTTGGATACC-3'

DGZT Primer Probe：5'-FAM-AAACCTTCCAAGGACCACC-BHQ1-3'。

进一步地，所述引物和探针的PCR反应条件为：95℃，2min；95℃ 15s，55℃ 34s，共40个循环。

进一步地，所述引物和探针的使用浓度比为：DGZT Primer-F:DGZT Primer-R:DGZT Primer Probe＝1:1:2

本发明还提供了一种大果紫檀的PCR鉴定方法，包括如下步骤：

(1)木材样本的预处理；

(2)提取经(1)处理后的木材样本中的DNA；

(3)利用引物DGZT Primer-F和DGZT Primer-R，以及探针DGZT Primer Probe对(2)中提取的DNA进行荧光PCR扩增；

(4)木材种类的确定；

所述引物和探针序列包括：