[发明专利]一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法有效
| 申请号： | 201910516427.X | 申请日： | 2019-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN110218250B | 公开（公告）日： | 2020-06-16 |
| 发明（设计）人： | 许宝红;苏建明;兰时乐;刘巧林;肖调义 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K16/06 |
| 代理公司： | 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 | 代理人： | 何为;袁颖华 |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 草鱼 补体成分 克隆 抗体 制备 方法 | ||
1.一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法，其特征在于，该方法步骤如下：
(1)以草鱼DNA为模板，利用SEQ ID NO.1所示的pET-28a-SUMO-C5-F和SEQ ID NO.2所示的pET-28a-SUMO-C5-R引物对，PCR扩增合成如SEQ ID NO.3所示的草鱼补体成分5基因片段；将纯化后的草鱼补体成分5基因片段连接至pET-28a-SUMO表达载体上以构建得到重组表达载体，将该重组表达载体导入表达大肠杆菌E.coli Rosetta中表达，纯化后获得草鱼补体成分5抗原；
(2)利用该草鱼补体成分5抗原免疫实验级日本大耳白兔，采血，收集抗血清，将抗血清纯化得到浓缩后的草鱼补体成分5多克隆抗体。
2.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中PCR扩增反应条件为95℃预变性5分钟，后接35个循环的常规PCR：94℃变性30秒、56℃退火30秒、72℃延伸30秒，最后72℃延伸10分钟。
3.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述利用该草鱼补体成分5抗原免疫实验级日本大耳白兔的过程如下：第一次免疫采用的免疫剂量为0.6mg，使用完全弗氏佐剂；12天后进行第二次免疫，使用草鱼补体成分5抗原的剂量为0.3mg，使用不完全弗氏佐剂；第一次免疫26天后进行第三次免疫，使用草鱼补体成分5抗原的剂量为0.3mg，使用不完全弗氏佐剂；第一次免疫40天后进行第四次免疫，使用草鱼补体成分5抗原的剂量为0.3mg，使用不完全弗氏佐剂。
4.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述采血时间为第一次免疫后52天。
5.如权利要求1所述的一种草鱼补体成分5多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述将抗血清纯化是用草鱼补体成分5抗原作抗原亲和纯化。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于湖南农业大学，未经湖南农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910516427.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
