[发明专利]一种用于检测鼻咽癌的标志物及其应用

说明书

本发明涉及基因治疗和医学诊断技术领域，本发明提供了一种生物学标志物EBV‑miR‑BART3在制备鼻咽癌早期诊断和预后预测的诊断试剂盒中的应用，本发明进一步提供了一种针对EBV‑miR‑BART3检测来进行鼻咽癌诊断的试剂盒，包括：（1）血浆中总RNA的提取；（2）血浆中EBV‑miR‑BART3的cDNA合成；（3）探针法检测EBV‑miR‑BART3表达。本发明生物学标志物EBV‑miR‑BART3可作为早期诊断和预测预后的生物学标志物，该试剂盒诊断鼻咽癌的敏感度高，特异性强。

技术领域

本发明涉及基因治疗和医学诊断技术领域，具体涉及一种生物学标志物EBV-miR-BART3在制备鼻咽癌早期诊断和预后预测的诊断试剂盒中的应用。

背景技术

鼻咽癌是我国南方的恶性肿瘤之一,好发于青壮年（35-55岁）,年标化发病率可高达15-30/100000。早期鼻咽癌5年生存率可达90%,但晚期患者仅50%左右。由于解剖部位特殊，早期症状隐匿, 70%以上的患者就诊时已是中晚期。因此,研究鼻咽癌的发病机制,发现简单、有效的肿瘤标志物,以提高鼻咽癌早期诊断率和预测预后能力,是鼻咽癌未来防治的重点工作。

EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV) 感染是鼻咽癌的最主要致病因素之一。研究发现：几乎100%的非角化型鼻咽癌具有EBV感染，因此,通过检测EBV基因产物可协助鼻咽癌的诊断。关于鼻咽癌外周血标志物的探讨显示,在EBV EBNA-IgA和VCA-IgA持续升高人群中,鼻咽癌的发病风险呈逐年升高,但作为NPC早期筛查和诊断指标,其敏感性及特异性很低,例如EBV VCA-IgA阳性人群中NPC的检出率仅为3.19%。血浆EBV DNA是目前研究最多的鼻咽癌肿瘤标志物,在NPC的筛查、早期诊断、治疗和预后检测方面均有临床价值。利用血浆中的EBV DNA筛查早期无症状NPC患者,其敏感性及特异性分别为97.1%、98.6%，且数据显示NPC患者确诊时间明显提前,预后更佳。但是,由于各个实验室EBV DNA检测技术、检测平台、阈值等不一致,目前没有标准化的流程，导致其诊断鼻咽癌的实用性、可重复性、推广性存在很大的困难。因此,血浆EBV DNA是否能作为理想的鼻咽癌肿瘤标志物有待进一步研究。

微小RNA（microRNA, miRNA）是一类长度约为20～23个核苷酸的小分子非编码RNA,它通过与靶基因完全或不完全的互补配对,降解靶基因或阻遏其转录或翻译。miRNA可通过扮演癌基因或抑癌基因角色,从而参与肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭转移、免疫逃逸等过程,是近几年肿瘤标志物的研究热点。目前研究发现，EBV共编码 22个EBV-miR-BARTs前体,形成 44个成熟的miRNA,且EBV-miR-BARTs大量表达于鼻咽癌组织中，而在健康者或非鼻咽癌癌症患者中低表达或不表达。因此,筛选鼻咽癌中特异表达的EBV-miR-BARTs,作为潜在的鼻咽癌早期筛查、早期诊断、最佳治疗方案决策、预测预后、检测复发等方面的肿瘤生物学标志,具有极其重要的临床意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生物学标志物EBV-miR-BART3在制备鼻咽癌早期诊断和预后预测的诊断试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种生物学标志物EBV-miR-BART3在制备鼻咽癌早期诊断和预后预测的诊断试剂盒中的应用，所述EBV-miR-BART3的序列如SEQ ID No.1所示：CGCACCACUAGUCACCAGGUGU。

该试剂盒是通过PCR技术检测生物样品中EBV-miR-BART3的表达量。

所述试剂盒包括对EBV-miR-BART3具有检测特异性的引物序列和探针，其序列如下：

上游引物为miR-BART3-F：5’- TCGATCGCACCACTAGTCA-3’;