[发明专利]PCR油相组合物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种PCR油相组合物，包括以下体积份组分：氟化油、矿物油、聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂、聚乙二醇、D‑海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯。具有静置稳定性和热循环稳定性良好的有益效果。公开了一种PCR油相组合物的制备方法，包括：将氟化油和矿物油混合均匀；加入聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂混合均匀，得第一混合液；将聚乙二醇、D‑海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯混合均匀，加入至第一混合液中混合均匀，然后冷却，超声处理，冷却，超声处理，冷冻，超声处理，制备的油相组合物的耐热变化性能良好。

技术领域

本发明涉及生物技术领域。更具体地说，本发明涉及一种PCR油相组合物及其制备方法。

背景技术

微滴式数字PCR系统结合了油包水乳化微滴技术与微流体技术，将每个样品生成数万个均一的纳升级微滴，目的片段和背景序列在微滴中随机分布，每个微滴都是一个独立的PCR反应器，完成PCR扩增后，微滴分析仪对微滴逐个进行荧光检测。微滴生成油的是制备油包水微滴的核心试剂，生成的微滴的稳定性，尤其是热循环稳定性是扩增的关键技术，因此，提供一种热循环稳定的油相组合物是值得本领域技术人员思量的。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种PCR油相组合物，生成的微滴静置稳定性和热循环稳定性均良好，提供了一种PCR油相组合物的制备方法，可以提升油相组合物的耐热变化性能。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种PCR油相组合物，包括以下体积份组分：氟化油、矿物油、聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂、聚乙二醇、D-海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯，其中，氟化油与矿物油的质量比为5～6:1，氟化油和矿物油的总质量占油相组合物总质量的88～95％。

优选的是，氟化油为聚全氟异丙醚油或氟氯碳油。

优选的是，聚乙二醇的平均分子量为400或1450。

优选的是，聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂的质量比为1:0.05:0.2:0.1。

优选的是，聚乙二醇、D-海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯的质量比为1:0.5:0.2。

提供一种PCR油相组合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、将氟化油和矿物油置于45℃下振荡混合均匀；

步骤二、然后加入聚氧乙烯月桂醚、三聚甘油单硬脂酸酯、双乙酰酒石酸单双甘油酯、大豆磷脂混合，置于60℃下超声处理，直至混合均匀，得第一混合液；

步骤三、将聚乙二醇、D-海藻糖、月桂醇聚氧乙烯醚琥珀酸单酯混合，置于80℃下超声处理，直至混合均匀，然后加入至步骤二中的第一混合液中，置于60℃下超声处理，直至混合均匀，然后置于10℃下冷却1h，再置于45℃下超声处理40min，然后置于0℃下冷却1h，再置于45℃下超声处理40min，然后置于-18℃下冷冻30min，再置于45℃下超声处理40min，即得油相组合物。

优选的是，超声处理的频率均为80kHz。

本发明至少包括以下有益效果：

第一、PCR油相组合物，生成的微滴静置稳定性和热循环稳定性均良好。

第二、经过反复多次冷却、热处理、冷冻的处理后，可以提升油相组合物的耐热变化性能。

第三、可应用于单细胞检测实验，经过一天时间使用显微镜观察，细胞存活于液滴中心，而没有附着于液滴表面。