[发明专利]一种禽流感病毒H9N2亚型毒株及其应用

说明书

本发明公开了一种禽流感病毒H9N2亚型毒株及其应用，属于动物病毒学领域。所述毒株为A/Chicken/Henan/1283/2016，于2019年5月28日保存至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物（CGMCC），保藏编号为CGMCC No.17695。该毒株发生抗原变异，与同时期分离的大部分毒株抗血清反应滴度下降，对SPF鸡的感染能力下降，对BLAB/c小鼠的感染能力增强，这对于研究禽流感病毒的流行变异规律和控制禽流感的流行将具有非常重大的意义，并且可以作为研究H9N2 AIV跨物种感染哺乳动物的模型毒株。

技术领域

本发明属于动物病毒领域，具体地，涉及一种禽流感病毒H9N2亚型毒株及其应用。

背景技术

禽流感(Avian influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一种禽类病毒性传染病。AIV为单链负RNA病毒，基因组由8条单股负链RNA构成。根据病毒表面糖蛋白(HA)和神经氨酸酶(NA)的抗原性差异，禽流感病毒(Avian influenza virus，AIV)可划分为18个HA亚型和11个NA亚型；依据AIV对SPF鸡致病性的强弱，将其分为高致病性AIV(HPAIV)和低致病性AIV(LPAIV)两种类型。H9N2亚型AIV属于LPAIV，但能引起家禽较为严重的疫病，特别是混合感染会导致较高的死亡率。禽类感染AIV后，症状可表现为非显性感染、亚临诊感染，或轻度呼吸道疾病、产蛋量降低直至急性全身致死性疾病等多种形式。目前国内防控H9N2AIV主要措施是接种疫苗，由于疫苗免疫选择压等原因，其抗原变异频率很高。其次，H9N2AIV通常感染鸡、火鸡、鸭、鹅、野鸟和水禽等宿主，具有种属特异性，但其广泛存在变异重组现象，近几年来，关于AIV跨越种间屏障感染哺乳动物(猪、狗)和人的报道增加。H9N2AIV抗原变异规律、及其在哺乳动物体内适应、传播和引起致病是过去10多年科研工作者不断研究的课题。

发明内容

为了解决上述技术问题，发明人于2016年2月份自河南分离出一株鸡源H9N2亚型AIV命名为A/Chicken/Henan/1283/2016，测定其全基因组序列，对其抗原变异和致病性进行分析，结果表明该毒株发生抗原变异，与同时期分离的大部分毒株抗血清反应滴度下降，对SPF鸡的感染能力下降，对BLAB/c小鼠的感染能力增强，这对于监控禽流感病毒的流行变异规律和控制禽流感的流行将具有非常重大的意义，并且可以作为研究H9N2AIV跨物种感染哺乳动物的模型毒株。

本发明是通过以下措施实现的：

本发明一方面提供了一株H9N2AIV毒株A/Chicken/Henan/1283/2016，从河南发病肉鸡群的肝脏和肾脏组织样品中分离得到。收集纯化的病毒通过SPF鸡胚扩增后HA效价为8，利用SPF鸡胚测定其鸡胚半数感染剂量EID₅₀为10^8.25/0.2mL，测定其平均死亡时间MDT为74.4h。该病毒尿囊液于2019年5月28日送交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China General Microbiological Cultural Collection Center，CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.17695。

进一步地，用RNAiso按照试剂盒说明提取H9N2AIV RNA并反转录为cDNA。根据各个节段参考序列设计合成H9N2AIV全基因组扩增引物进行扩增，获得各基因节段完整的开放阅读框(PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M、NS)，分别具有SEQ ID NO.27～SEQ ID NO.34所示的核苷酸序列。

进一步地，将A/Chicken/Henan/1283/2016病毒与同时期分离的流行毒株抗血清进行交叉血凝抑制试验，取三次实验的平均值用于R值分析，发现该毒株和近年来分离的大部分流行株抗原性差异较大。