[发明专利]一种翅果油树人工种子的制作方法

权利要求书

1.一种翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；

步骤2、实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基和激素母液；

步骤3、种子的处理：将步骤1采集的种子外果皮、中果皮以及褐色种皮全部剥掉，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗20-40min，再用60％-80％的酒精浸泡冲洗5-10min，用无菌水冲洗2-4次，最后用8％-12％的次氯酸钠溶液浸泡冲洗5-10min，在超净工作台上用无菌水冲洗4-6次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡；

步骤4、种子的接种与培养：接种前在超净工作台用50-70mg/L的赤霉素溶液浸泡20-40min，然后接种在添加有琼脂和激素的1/2MS培养基中培养，所述培养基的配方为：1/2MS+IBA 8-12mg/L+NAA 0.5-2mg/L；

步骤5、人工种胚的获取：将步骤4的种子培养40-50天后，翅果油树小苗生长到高度为8-10厘米，在超净工作台上用预先消毒的剪刀剪取2-4mm长的带腋芽的茎段作为人工种胚；

步骤6、人工种皮和人工胚乳的制备：在预先配制的0.2-0.3mol/L氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/L青霉素，获得A溶液；

在预先配制的2％-4％海藻酸钠溶液中加入3-5mg/L IBA和8-12mg/L NAA，获得半凝胶状态的B溶液；

步骤7、人工种子的包埋：将步骤5获取的人工种胚放入B溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡2-5min，然后用滴管吸取混合有B溶液的人工种胚滴入A溶液内浸泡10-20min，形成人工种子后用无菌水冲洗2-4次，吸取表面水分得到人工种子。

2.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，步骤2中实验室和实验用具的消毒方法为：实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头。

3.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，步骤2中配制的1/2MS培养基和激素母液消毒方法为：配制好的1/2MS培养基在使用前进行高压锅灭菌，高压锅的使用条件为121℃、18min；配制好的激素用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。

4.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，步骤3中所述种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮。

5.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，步骤3中带革质种皮的种子消毒处理方法为：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡。

6.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，所述步骤4种子接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在添加有琼脂和激素的1/2MS培养基中培养。

7.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，所述步骤4中添加激素母液的1/2MS培养基配方是1/2MS+IBA 10mg/L +NAA 1mg/L。

8.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，步骤4中所述的培养条件为：光照强度1200-1500lx，光照时间10-12小时/天，温度23℃±2℃。

9.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，所述步骤6中人工种皮和人工胚乳制备的具体方法为：在预先配制的0.2mol/L氯化钙溶液中加入0.3％多菌灵粉剂，再加入0.1mg/L青霉素，获取A溶液；

在预先配制的4％海藻酸钠溶液中加入4mg/L的IBA和10mg/L的NAA，获取半凝胶状态的B溶液。

10.根据权利要求1所述的翅果油树人工种子的制作方法，其特征在于，所述步骤7的人工种子包埋的具体方法为：将步骤5获取的人工种胚放入B溶液中，使其呈悬浮状态并充分混合，浸泡3-4min，然后用滴管吸取混合有B溶液的人工种胚滴入A溶液内浸泡15min，形成人工种子后用无菌水冲洗2-3次，吸取表面水分得到人工种子。