[发明专利]一种制备心肌补片的方法及其应用

权利要求书

1.一种制备心肌补片的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)制备心肌补片材料；(2)采用介电电泳控制细胞在补片材料均匀排布所述细胞为原代心肌细胞或多能干细胞，所述多能干细胞为脂肪干细胞，间充质干细胞或骨髓干细胞；所述步骤(2)的方法为：将心肌补片材料置于电极上，使心肌细胞悬浮于介电电泳缓冲溶液中，将含有心肌细胞介电电泳缓冲溶液滴加至心肌补片材料上，并提供频率为1MHz的交流电压6Vpk-pk，共3分钟；待细胞排列完成之后，在介电电泳缓冲溶液内添加入6mM CaCl₂和5mM MgCl₂，并以8μL/min的流速流动洗涤10分钟；加入DMEM/F12细胞培养液替换介电电泳缓冲溶液，以8μL/min的流速流动洗涤15分钟；所述介电电泳缓冲溶液为含8.5％蔗糖、0.3％葡萄糖的溶液，电导率为0.08S/m；所述步骤(1)的方法为：a.将明胶，甘油，结冷胶制备成透明的MA-Gelzan-Gly共混液；b.将甲基丙烯酸酐加入到共混液，获得改性的MA-Gelzan-Gly水凝胶；c.将改性的MA-Gelzan-Gly水凝胶与氧化石墨烯混合，获得负载氧化石墨烯的MA-Gelzan-Gly-Go水凝胶；d.将MA-Gelzan-Gly-Go水凝胶与多巴胺、伊桐苷混合，以过硫酸铵为引发剂，TEMED为聚合助剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤a为：将2g明胶在60℃条件下完全溶解于磷酸盐缓冲液中，获得10w/v％的明胶溶液，将0.8g的甘油溶于蒸馏水中，获得4w/v％的甘油溶液，将1g的结冷胶在60℃条件下溶于蒸馏水中，获得10w/v％的结冷胶溶液，将上述三种溶液以1.2:1:1.5的比例混合，磁力搅拌1h，得到MA-Gelzan-Gly共混液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤b为将4mL的甲基丙烯酸酐缓慢滴加到MA-Gelzan-Gly共混液中；在50℃的条件下搅拌1-3小时，使之逐渐反应，然后加入PBS进行稀释后终止反应，反应物加入透析袋内用去离子水透析5-9天，每6-12小时更换一次去离子水，冷冻干燥保存，获得改性的MA-Gelzan-Gly水凝胶；所述步骤c为：将40mg的石墨烯制备成4mg/mL溶液，将步骤b中改性的MA-Gelzan-Gly水凝胶制备成10％溶液，将10％的MA-Gelzan-Gly水凝胶溶液与石墨烯溶液以4:2的比例进行混合，置于4℃冰箱2-4h，获得负载氧化石墨烯的MA-Gelzan-Gly-Go水凝胶。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤d为：在步骤(3)制备的MA-Gelzan-Gly-Go水凝胶，加入0.12g的多巴胺、0.25g的伊桐苷，混合均匀，加入3mL 20％的过硫酸铵和1mL TEMED溶液，置于4℃冰箱过夜，获得所述用于制备心肌补片的组合物MA-Gelzan-Gly-Go-Ito-DA。

5.根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤f：取300μL步骤(4)获得的组合物，滴至PDMS模板表面，将玻片轻扣于水凝胶溶液表面，室温静置一天或置于4℃中成胶，水凝胶成胶风干后，重复上述步骤2-5次，获得2-5层的凝胶层，将其从PDMS模板上剥离，即制MA-Gelzan-Gly-Go-Ito-DA心肌补片材料。

6.权利要求1-5任一项所述的方法制备得到的心肌补片。

7.权利要求6所述的心肌补片在制备治疗心肌梗死的产品中的用途。