[发明专利]用于食源性微生物检测的微液滴电化学传感器及制备方法

权利要求书

1.一种用于食源性微生物检测的微液滴电化学传感器，其特征在于，所述微液滴电化学传感器是利用双信号放大体系策略对食源性微生物特异基因片段进行痕量检测，所述双信号放大体系包括第一信号放大体系和第二信号放大体系；

所述第一信号放大体系，用于在目标基因片段的存在下，被阻断的第一探针被激活作为第一DNA步行器，在切刻内切酶辅助下，导致第二探针部分序列被释放并作为第二DNA步行器，从而实现第一步信号放大；

所述第二信号放大体系，用于在第二DNA步行器打开一端修饰巯基的第三探针的发夹结构后形成双链DNA，此双链DNA将通过二链置换被一端修饰二茂铁的第四探针解离以释放第二DNA步行器并用于下一个循环，从而实现第二步信号放大。

2.根据权利要求1所述的微液滴电化学传感器，其特征在于，所述第一信号放大体系包括第一探针、第二探针、阻断DNA和链霉亲和素磁珠；

所述第二信号放大体系包括第三探针、第四探针和超疏水金电极；

其中，所述第一DNA步行器由第一探针、第二探针和阻断DNA包覆在所述链霉亲和素磁珠的表面形成；

所述阻断DNA为将第一探针的可与第二探针结合形成酶识别位点的部分序列保护起来的单链DNA。

3.根据权利要求1所述的微液滴电化学传感器，其特征在于，所述第三探针和第四探针均设置在所述超疏水金电极的表面；所述第三探针和第四探针均为发卡结构。

4.根据权利要求3所述的微液滴电化学传感器，其特征在于，所述超疏水金电极自上而下依次为：ITO导电玻璃、基础层、纳米结构金层和超疏水表面，所述超疏水表面设置有亲水微孔。

5.据权利要求4所述的微液滴电化学传感器，其特征在于，所述基础层包括钛层和平面金层；所述钛层和平面金层通过磁控溅射方法修饰到所述ITO导电玻璃的导电一侧。

6.据权利要求4所述的微液滴电化学传感器，其特征在于，所述纳米结构金层用电化学沉积方法修饰于平面金层。

7.一种制备如权利要求1-6任意一项所述的微液滴电化学传感器的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1）第一步信号放大体系制备：首先在浓度为0.3-1 M / L的缓冲液中加入阻断DNA和第一探针的混合溶液中，阻断DNA和第一探针的浓度比为3-5:1；反应后形成双链DNA，然后,将获得的双链DNA和第二探针按照浓度比为1:8-10同时加入到浓度为0.5~2mg / mL链霉亲和素磁珠的磷酸缓冲盐溶液中，常温下反应后通过磁力分离，得到第一步信号放大体系；

S2）超疏水金电极制备：选取ITO导电玻璃，然后依次将基础层、纳米结构金层和超疏水表面覆盖在所述ITO导电玻璃，即得到超疏水金电极；

S3）第二步信号放大体系制备：将0.1~1μM的第三探针加到S2）得到的超疏水金电极的微孔上并在室温下反应，再用超纯水冲洗未修饰上的第三探针，将可通过静电吸附或者Au-S键对未结合上第三探针的区域进行封堵的封堵物滴在微孔上反应以封闭未被第三探针结合的区域，

最后用超纯水冲洗并用氮气干燥，即得到微液滴电化学传感器。