[发明专利]一种裸盖鱼精子冷冻保存的方法

权利要求书

1.一种裸盖鱼精子冷冻保存的方法，其特征在于：所述方法主要包括精子的获取、培养液的制备、精子的冻存过程、精子的复苏与激活过程；

具体步骤如下：

S1，针对性成熟的裸盖鱼，采用人工麻醉的方法获取精子；

S2，根据裸盖鱼的精子渗透压，制备精子培养液；

S3，将采集到的精液与培养液按1∶2的体积比混合制得混合液，然后加入混合液体积10％的二甲基亚砜制成精子冻存混合液；

S4，将混匀后的精子冻存混合液样品置于4℃冰箱中15min，接着于液氮罐瓶口处静置5min后向下移，液氮液面上方再置5min，液氮液面再置5min，然后浸入液氮中冷冻保存；

S5，冷冻保存24小时后，将精子冻存液样品从液氮中取出，置于室温解冻15min，再置于10℃水中解冻15min，用培养液与冻存精液2∶1的体积比的量来激活精子，再用台盼蓝染色液与激活后的精液按体积比1∶9将精子染色，放于显微镜下观察、评价精子活力，用血球计数板进行计数。

2.根据权利要求1所述的一种裸盖鱼精子冷冻保存的方法，其特征在于：所述培养液的配方为：氯化钠0.8～1.7g、碳酸氢钠0.06～0.07g、无水氯化钙0.064～0.069g、葡萄糖1.4～1.7g、Tris碱0.04～0.06g、胎牛血清0.4～0.5g、谷胱甘肽0.12～0.13g。