[发明专利]核酸液相提取及检测方法

说明书

本发明涉及核酸液相提取及检测方法。本发明公开了一种从生物样品中提取核酸分析物溶液的方法，包括：将生物样品置于加热容器中；任选地，向该生物样品加入溶解介质；对该生物样品进行高压加热；任选地，对该生物样品进行离心；和获取包含所述核酸分析物的液体。本发明也公开了一种检测核酸分析物的方法，该核酸分析物是用上述提取方法获得的。

本申请是国际申请日为2011年4月27日的国际申请PCT/CN2011/000746进入中国、申请号为201180049214.2的题为“核酸液相提取及检测方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及核酸的提取和检测，更具体地说，本发明涉及利用高压加热从生物样品中液相释放核酸和对其进行检测的方法。

背景技术

基因检测在现代临床医学中的作用越来越重要。基因检测的第一步是从固定或未固定的生物样本中提取核酸。

传统的化学方法，通常先用酶消化细胞或组织，再经有机溶剂抽提，使被分离的核酸经过酒精或异丙醇沉淀，收集并浓缩于水中。整个过程需2-3天。特别是石蜡包埋组织，还需多次二甲苯脱蜡、高浓度蛋白酶长时间消化等步骤，低时效的劣势更为突出。

近些年，国内外研发了多种固相核酸提取试剂盒，原理大多为裂解细胞，释放核酸，核酸吸附于某些颗粒的表面，再进行沉淀或洗脱。这些方法相对缩短了核酸提取的时间，但距离低廉高效、简单易行的目标依旧太远。

随着基因检测不断上升的地位，核酸提取技术与涌现出的基因检测新方法、新技术相比较，一直没有得到同步的创新、突破。能否获得合格的核酸样本，已成为基因检测成败的关键。特别是高度依赖于石蜡包埋组织的基因型分析或诊断。

发明内容

本发明提供了一种从生物样品中提取核酸分析物溶液的方法，包括以下步骤：将该生物样品置于加热容器中；任选地，向该生物样品中加入溶解介质；对该生物样品进行高压加热；任选地，对该生物样品进行离心；和获取包含所述核酸分析物的液体。

本发明的方法特别适用于从福尔马林固定的石蜡包埋组织中提取核酸。该方法通过一步高压加热，同时完成石蜡包埋组织的脱蜡、裂解组织细胞、解交联等，直至液相释放核酸。

本发明还提供了一种对生物样品中的核酸分析物进行检测的方法，包括按照本发明的方法获得所述核酸分析物的溶液，以及对所述核酸分析物进行检测，优选通过聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)进行检测。

本发明的方法操作简单(例如目前常用的核酸提取试剂盒需要20多个步骤)，速度快，成本低，不需要特殊的设备和试剂，简单的操作方法易于掌握，大大地提高了核酸溶液制备和检测的效率。

附图说明

图1A显示了K-ras exon 2的12密码子点突变(G12S)，5’→3’；图1B显示了同一标本的反向测序结果(3’→5’)。箭头表明突变位点。

图2显示了人大肠癌K-ras exon 2的12、13密码子的正常序列。

图3显示了白色念珠菌荧光PCR的结果。其中纵坐标为荧光量，横坐标为PCR循环数，两条曲线为阳性结果。

图4显示了人血清HBV病毒575、241、192bp HBV特异片段的电泳结果。

图5显示的是一幅电泳图，其中：[1]人胃肠道间质瘤石蜡包埋组织；[2]人大肠癌石蜡包埋组织；[3]100bp标记物；[4]人新鲜甲状腺癌组织；[5]培养细胞。

图6显示的是饱和蒸汽温度与压力关系对照表。

具体实施方式