[发明专利]一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法

权利要求书

1.一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极依次用1.0 μm、0.3 μm、0.05 μm氧化铝做抛光处理，用超纯水冲洗干净；

（2）在玻碳电极表面滴加6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL捕获抗体Ab₁标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液，置于4 °C下晾干；

（3）滴加3 μL、质量分数为1 ~ 3%的牛血清白蛋白溶液，以封闭电极表面的非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，置于4 °C晾干；

（4）滴加6 μL降钙素原的标准溶液或未知浓度的溶液，37 °C下孵化0.5 ~ 2 h，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，置于4 °C晾干；

（5）滴加6 μL、浓度为2 ~ 4 mg/mL的检测抗体Ab₂标记的铈掺杂二硫化锡-鲁米诺溶液，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，置于4 °C晾干，传感器构建完毕。

2.根据权利要求1所述一种石墨烯/聚苯胺纳米线阵列免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述捕获抗体Ab₁标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液，通过如下步骤制备：

向0.13 ~ 0.15 g的四氯钯酸钠与0.13 ~ 0.15 g的柠檬酸钠固体中，加入30 ~ 50 mL的去离子水，将混合固体均匀溶解，然后，将0.5 ~ 0.7 mL的硼氢化钠溶液逐滴加入混合液，最后，通过持续搅拌得到黑色的钯纳米粒子，避光储存于4 °C下；

将0.4 ~ 0.6 g氧化石墨烯加入含有90 ~ 110 mL无水二甲基甲酰胺的烧杯当中，随后，在冰水浴的条件下，取2.78 ~ 2.98 g 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐加入到上悬浮液中，并且在氮气氛围下搅拌1 ~ 3 h，然后加入1.8 ~ 2.0 mL的 1, 3-二氨基丙烷在室温下搅拌过夜，最后用水和乙醇分别洗涤后干燥得到氨基化氧化石墨烯；

取5 ~ 15 mg氨基化氧化石墨烯分散在5 ~ 15 mL盐酸溶液中，经过超声波处理15 ~45 min，将其分散均匀，悬浊液放在冰浴中冷却至0 °C，然后将0.4 ~ 0.6 mL苯胺加入到氨基化氧化石墨烯中继续搅拌，并缓慢加入5 ~ 15 mL溶有1.25 ~ 1.45 g过硫酸钾的溶液，该反应在冰浴中持续4 ~ 6 h后，加入浓度为0.1 mol/L的盐酸溶液去除所有未反应的反应物，用去离子水和己烷各洗涤3次后，干燥12 h，得到石墨烯/聚苯胺溶液；

将1 ~ 3 mL、浓度为2 mg/mL的石墨烯/聚苯胺溶液与1 ~ 3 mL的钯纳米粒子溶液混合，避光振荡24 ~ 48 h，离心分离弃去上清液，分散到1 mL超纯水中，制得钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液，随后加入50 ~ 150 uL、浓度为1 ug/mL的捕获抗体Ab₁溶液振荡6 ~ 18 h后，经过离心分离后分散到 2 mL、pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到捕获抗体Ab₁标记的钯杂化石墨烯/聚苯胺溶液 。