[发明专利]利用复方红衣补血口服液药渣发酵生产链霉素的方法

说明书

本发明属于微生物技术领域，公开了利用复方红衣补血口服液药渣发酵生产链霉素的方法，其包括如下步骤：将灰色链霉菌种子培养液按照10%的接种量接入到利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基中，以200‑300rpm，通气量为0.3‑0.4vvm，32‑35℃发酵72小时以上；发酵过程中，通过补加葡萄糖，控制发酵液中葡萄糖的浓度不低于0.5%。本发明方法使用了药渣，实现了变废为宝。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及利用复方红衣补血口服液药渣发酵生产链霉素的方法。

背景技术

链霉菌是生产链霉素的主要菌种。链霉素是一种从灰链霉菌的培养液中提取的抗菌素，属于氨基糖甙碱性化合物，是治疗结核杆菌的主要药物。由于链霉素肌肉注射的疼痛反应比较小，适宜临床使用，只要应用对象选择得当，剂量又比较合适，大部分病人可以长期注射。链霉菌发酵法制备链霉素过程中，需要用到培养基，而培养基一般采用酵母膏、葡萄糖等组分，成本高昂；随着近年来原料成本的提升，相关制药企业利润大幅降低，甚至面临亏损的问题。需要研究成本低廉的培养基。

申请人之前的专利技术“一种处理复方红衣补血口服液药渣的环保工艺”，通过对复方红衣补血口服液药渣进行回收利用，选择粪肠球菌-产黄纤维单胞菌的组合方式对复方红衣补血口服液药渣发酵，以降解药渣制备菌体蛋白，其中，处理物中蛋白含量接近30%，纤维素降解率达到40%左右，营养价值较高，适合应用到饲料蛋白中；但是饲料蛋白的附加值较低，申请人继续对处理物进行了进一步地研究，以提升应用价值。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明在“一种处理复方红衣补血口服液药渣的环保工艺”的基础上进行改进，其目的在于提供利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基，据此，公开了利用复方红衣补血口服液药渣发酵生产链霉素的方法，该方法成本低廉，采用药渣发酵制备链霉素，降低了企业成本。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

利用复方红衣补血口服液药渣发酵生产链霉素的方法，其包括如下步骤：将灰色链霉菌种子培养液按照10%的接种量接入到利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基中，以200-300rpm，通气量为0.3-0.4vvm，32-35℃发酵72小时以上；发酵过程中，通过补加葡萄糖，控制发酵液中葡萄糖的浓度不低于0.5%。

进一步地，所述利用复方红衣补血口服液药渣制备的链霉菌培养基按照如下步骤制备而得：步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理，步骤2）水解制备氮源组分，步骤3）制备链霉菌培养基。

进一步地，所述链霉菌培养基按照如下工艺制备而得：

步骤1）对复方红衣补血口服液药渣进行发酵处理：将粪肠球菌种子液按照20%的接种量接种到含有复方红衣补血口服液药渣的发酵原料，发酵24-48h后，再按照20%的接种量接入产黄纤维单胞菌种子液，继续发酵72-96h，得到发酵产物；

步骤2）水解制备氮源组分：将发酵产物置于高速剪切机中剪切，然后以频率为30kHz的超声波处理10-15min，再添加氨水调整pH为7.5，然后添加中性蛋白酶和碱性蛋白酶，100rpm搅拌酶解7-9h，再加热至95℃灭酶5min，然后1000rpm离心3-5min，收集上层液体，即得氮源组分；

步骤3）制备链霉菌培养基：以下组分按照重量百分比计：氮源组分30%，葡萄糖3.0%，硫酸铵0.5%，磷酸二氢钾0.1%，磷酸氢二钾0.1%，七水硫酸镁 0.01%，七水硫酸亚铁0.01%，其余为水。

优选地，所述中性蛋白酶和碱性蛋白酶的添加量分别为500U/ml和300U/ml。

优选地，所述剪切速度为10000rpm，剪切时间为120s。