[发明专利]建立化学发光免疫法检测和肽素试剂盒

权利要求书

1.一种化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括：

A. CPP校准品；B.AE-CPP抗体反应液（R1Buffer）；C. Biotin-CPP抗体反应液(R2Buffer); D.SA-MMP反应液(R3 Buffer)；E. H₂O₂预激发液；F. NaOH激发液；G. 洗涤液。

2.根据权利要求1所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：CPP校准品由合成CPP肽制备而成，氨基酸序列（SEQ ID NO.1）: ASDRSNATQLDGPAGALLLRLVQLAGAPEPFEPAQPDAY。

3.根据权利要求1所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：磁微粒MMP表面经过氨基，羧基、羟基或环氧基修饰的一种，MMP直径为0.2-4.0um，MMP具有超顺磁性。

4.根据权利要求1所述化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：化学发光物，可为吖啶酯类（Acridinium ester）,鲁米诺及其衍生物，2-螺旋金刚烷-4-甲氧基-4-甲基-4-（3-磷酸氧基）-苯基-1，2-二氧乙烷（AMPPD），4-甲基伞形酮磷酸盐（4-MUP），三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+等。

5.根据权利要求4所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：Acridiniumester偶联CPP抗体制备过程：

Dimethylformamide（DMF）溶解Acridinium-NHS-ester，与CPP抗体混合反应，去除游离Acridinium-NHS-ester，获得纯化Acridiniumester-CPP抗体。

6.根据权利要求1所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：Biotin偶联CPP抗体制备过程：

用H₂O溶解Sulfo-NHS-Biotin，与CPP抗体混合反应，终止反应后，去除游离的Sulfo-NHS-Biotin，获得纯化Biotin-CPP抗体。

7.根据权利要求1所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：Streptavidin（SA）偶联Magnetic microparticle （MMP）过程：

（1）用MES 缓冲液洗涤羧基修饰 MMP；（2）加入碳二亚胺(EDC)和N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)反应；（3）洗涤MMP后, 加入SA反应；（4）终止反应；(5)洗涤MMP-SA后，复溶MMP-SA，放2-8℃，保存备用。

8.根据权利要求1所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：建立CLIA分析仪自动检测样品中CPP浓度步骤：

加5-50ul待测样品，包括校准品，血清，血浆，脑脊液或其它体液，加10-100ul R1Buffer，加10-100ul R2 Buffer,加5-50ul R3 Buffer 25-37°C, 反应10-60分钟，磁力吸附MMP-SA-Biotin-CPP抗体-CPP-CPP抗体-AE复合物，吸除游离物体后，进一步洗涤，加入H₂O₂预激发液，再加 NaOH激发液，启动AcridiniumEster系统化学发光反应，检测光强度值；CLIA分析仪检测浓度为 0, 2，5,10,25,50,100pmolCPP校准品光强度值，建立CPP浓度标准曲线，获得CPP浓度标准卡，进一步建立CLIA分析仪CPP浓度自动测定系统，测定待测样品中CPP浓度。

9.根据权利要求1所述的化学发光免疫法检测CPP试剂盒，其特征在于：试剂盒在检测血液，脑脊液或其它体液中CPP浓度，用于早期诊断脑血管梗塞或急性心肌梗死的发生。